提供商: | 嘉美实验 |
服务名称: | 分子生物学:引物合成实验服务 |
实验技术简介:引物合成是通过测定引物的OD值,溶解引物,最终合成引物的一个 完善的过程。目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯 法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的,相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二酯键连接。
实验操作流程:
1、脱保护:脱掉附加在CPG单体上的第一个碱基5’-OH基团上的保护基 (DMTr),准备附加下一个新的碱基。
2、活化:活化新的碱基单体 (Phosphoramidite),准备与第一个碱基进行反应。
3、偶联:第二个碱基与第一个碱基发生偶联反应。
4、封闭:将没有反应的第一个碱基的5’-OH加帽封死 (Capping),使其不再进一步参与反应。
5、氧化:将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯 (即将三价磷氧化成五价磷)。
重复进行一至五步的循环,直至合成完所需的引物 DNA序列。
6、合成结束后,将引物分子从CPG上切下,再进行进一步的纯化。
实验注意事项:
客户提供:
目标的基因序列
交付标准:
1、引物冻干粉
2. 检测报告
其他:
1、溶解引物的水pH过低或污染了菌或核酸酶,会使引物降解。
2、引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成无色或白色絮状干粉。
干粉:运输时常温运输,-20℃可以保存一年。
储存液:配好后分装成几管,避免反复冻融,-20℃可以保存半年。
工作液:常规使用,4℃保存,也可-20℃保存,但应避免反复冻融。
修饰荧光引物:需要避光保存,尽快使用为宜。
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