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原核蛋白表达以及纯化
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罗氏公司（Roche）蛋| 提供商： | 嘉美实验 |
| 服务名称： | 分子生物学：RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)实验服务 |
实验技术简介：RACE (rapid- amplification of cDNA ends)，即cDNA末端快速克隆技术。RACE基于PCR技术基础之上，先由 RT-PCR从RNA中获取cDNA片段，再通过设计引物与PCR向两端延伸扩增从而获得完整的3'端或5'端序列，是一种从低丰度的转录本中快速扩增 cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他获得新基因的方法，RACE原理简单、无需建立文库、快速廉价，正受到越来越多科研工作者的重视。
实验操作流程：
1. 总RNA的提取
我们将使用TRIzol法来提取实验材料的总RNA，这一步可由您自己完成。
2. cDNA的合成与检测
反转录生成cDNA的第一链，再生成cDNA第二链，电泳检测cDNA的产量。
3. RACE 扩增
我们使用锚定PCR（AnchoredPCR）与巢式PCR（Nested PCR）相结合的方法，用Clontech和Invitrogen公司的试剂盒分别进行3'末端和5'末端RACE。
4. RACE产物检测测序
将RACE产物TA克隆并进行测序。
实验注意事项：
客户提供：
1、提取Total RNA的材料：动植物组织，细胞或菌液（保证材料充足）；
2、或者由客户直接提供总RNA： 3’RACE：Total RNA>15μg；5’RACE：Total RNA>25μg。
2、3、序列信息：
大于200bp的已知序列(请注明已知序列的5’端及3’端)：如果已知序列比较短，建议先进行3’RACE再进行5’RACE，以提高实验的成功率；
4、实验数据和参考文献：这将会帮助我们更好地理解您的实验背景，有利于实验的顺利进行。
交付标准：
1、实验报告：引物信息实验过程 PCR产物照片；
2、测序结果：测序彩色波形图、测序方向图、碱基序列图；
3、实验产物：引物、测序用质粒（限产生克隆测序的情况）
其他：
1、提取Total RNA的材料要新鲜，采样后立即存于液氮或-80℃后保存不超过一个星期，或加入防止RNA降解的样品稳定剂，如果基因的含量较低或者未知序列较长，样品量需相应增加；
2、大于200bp的已知序列(请注明已知序列的5’端及3’端)：如果已知序列比较短，建议先进行3’RACE再进行5’RACE，以提高实验的成功率；
Tel：010-57425721/57425722 Fax：010-80780672
E-mail：lab-manager@jiamay.com
Web：www.jiamay.com.cn www.jiamay.com
400免费热线：400-0007-401
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