提供商: | 嘉美实验 |
服务名称: | 分子生物学:Shotgun 文库构建实验服务 |
实验技术简介:全基因组shotgun文库可运用于基因组DNA序列的测定和从 全基因中获得需要的基因。创新基因组为此能、提供一个高效、灵活的基因组shotgun文库构建的服务。我们有丰富的经验来构建各种来源的shotgun 文库,包括各种细菌,噬菌体,哺乳动物和其他生物的DNA。
实验技术原理:鸟枪战略(Shotgun Strategy)又称随机测序战略,是由美国塞莱拉遗传公司创始人克雷格·文特尔发明。此策略是将DNA用机械方法随机打断成小片段,并连入合适的载体 构建亚克隆文库。从中随机挑取克隆测序,再通过生物信息学方法对测得的序列进行拼接组装以获得大片段DNA的序列。因此,Shotgun文库构建是后期测 序,序列拼接的基础,也是鸟枪战略能否成功的关键之一。
我们可以根据要求构建不同插入片段大小的Shotgun文库,如1~2Kb,2~3Kb,3~4Kb,5~6Kb等。
实验操作流程:
1、高品质的DNA模板制备
2、随机打断DNA片段
3、将随机打断的片段和克隆载体相连,得到重组DNA
4、重组DNA转化及筛选
5、亚克隆DNA测序及质量控制
6、有效DNA的获得
7、在大多数的情况下3-4周就可完成
8、完成后将会提供给您原始的electropherograms和一块96孔板的测序数据
实验注意事项:
客户提供:
1、甘油菌液
2、沉菌
3、DNA
交付标准:
1、连接液(约10~20μl)
2、转化后的菌液(约500μl)
3、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
其他:
1、片段的插入大小通常<10kb
2、基本会有2x107 小片断插入的重组DNA,,1x107大片断插入的重组DNA
3、小片段的插入率95 %,大片段的插入率90 %
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