提供商: | 嘉美实验 |
服务名称: | 蛋白质组学:DIGE 技术实验服务 |
实验技术简介:DIGE — 双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术,其分离蛋白质混合的原理与双向电泳是一 致的,主要利用蛋白质的等电点和分子量的差异来分离蛋白质混合物,同时应用荧光染料的灵敏度及内标的使用等技术,使其在定量蛋白质组学的研究中效果明显优 于传统双向电泳。
DIGE使用的荧光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它们能与蛋白质的赖氨酸侧链氨基反应而使蛋白质被标记,被标记蛋白质的等电点和分子量几乎不受影响,等量混合标记好的蛋白质后进行双向电 泳,不同凝胶之间可以通过cy2内标匹配,消除凝胶之间的差异,蛋白质表达量的变化则通过cy3和cy5不同荧光的强度来体现。
实验操作流程:
1、蛋白质提取
2、染料标记
3、一向等电聚焦
4、二向SDS-PAGE
5、激光扫描
6、图像分析
实验注意事项:
客户提供:
1、组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存
交付标准:
1、DIGE荧光电子图片;
2、蛋白质点定量分析结果,包括差异点号码、差异倍数、pI和MW等;
3、完整实验报告,包括实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
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