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蛋白质组学：(原核)可溶蛋白表达实验
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罗氏公司（Roche）蛋| 提供商： | 嘉美实验 |
| 服务名称： | 蛋白质组学：SILAC 代谢标记定量实验服务 |
实验技术简介：SILAC的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素 (重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基 酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定，根据一级质谱图中两个同位素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体 内代谢标记法。
实验操作流程：
1、蛋白提取和样品制备
2、标记效率测试
3、样品混合
4、SDS-PAGE分级
5、酶解
6、质谱鉴定
7、软件分析
8、定性定量蛋白质组结果
9、生物信息学数据挖掘和统计分析
实验注意事项：
客户提供：
1、蛋白质提取物：浓度>1μg/μl，蛋白质总量 >300μg
2、细胞：通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）
交付标准：
1、蛋白质鉴定和SILAC定量分析结果；
2、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图；
3、SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
其他：
1、SILAC是体内标记技术，稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同，所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上几乎没有差异，标记效率可高达100％。
2、采用质谱定量，定量结果准确且批次变异小、重复性好。
3、体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白性质限制。
4、多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响一致，减少了实验操作和仪器设备产生的影响。
5、由于该技术属于体内标记，标记效果稳定，其标记效率不受裂解液的影响，不仅适合于进行全细胞蛋白的分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量。
6、与化学标记相比，SILAC方法蛋白需要量明显减少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。
7、活体标记，更接近样品真实状态。
8、只适用于活体培养的细胞，对于生物医学研究中常用的组织样品，体液样品等无法分析，对于动物模型的标记成本太大，无法实现。
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