货号: | XFH10424 |
样本: | 血清,血浆及相关液体 |
适应物种: | 人,大鼠,小鼠 |
应用: | 科研实验 |
检测方法: | elisa |
供应商: | 上海信帆生物科技有限公司 |
数量: | 10 |
规格: | 96T |
elisa试剂盒
☆★问:请问试剂盒的标曲应该怎么计算呢?
☆★答:老师,你好!计算的时候,以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。
☆★问:你好,我想咨询一下ELISA试剂盒的加样,怎么样才能确保加样准确呢,加样具体应该怎么加,用什么仪器?
☆★答:老师,你好。我们试剂盒在加样的时候,均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
☆★问:你好,我想了解一下你们试剂盒在洗涤的时候,有什么特别需要注意的地方吗?比如洗涤几次最好?
答,老师,你好!我们的试剂盒在操作的时候,洗涤一般是洗涤5次,然后拍干。其他你按照说明书操作即可。
☆★问:使用枪头加样注意事项?
☆★答:如果使用的枪头、加样槽是反复使用的,必须肯定其没有来自酶或阳性的污染。酶作为反应 的催化剂,及其微量也会很明显影响反应。反复使用的枪头、加样槽清洗不当,也会干扰反 应。同样枪头和加样槽不正确清洗,改变加入试剂的 PH 值,反应的结果也会不正常。
☆★问:OD值不正常,原因有哪些?
☆★答:有可能是孵育时间不准确,应该控制孵育时间。洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长
洗涤次数增加,可以洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干。酶标仪的波长错误,酶标仪的波长450nm。或者是温度控制不好,控制正确温度。水质问题,使用矿泉水来代替。等等。
☆★问:ELISA实验操作中加样的注意事项?
☆★答:样品稀释液少加,或血清多加,都会引起本底增高。所以我们应该严格按照说明书来操作,如果加入的血清过多,高于规定 的稀释倍数,必将带来阴性高值。另外加样时应将所加物加在 ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出。
☆★问:是否提供代测服务?
☆★答:购买我司ELISA试剂盒,可以提供免费代测服务。上海和南京地区的客户可以提供免费上门取样的服务,其他地方的老师可以把样本用EP管装好,编好号。放到泡沫箱子中,用干冰和冰袋寄送。我们是收到样本后7个工作日出实验报告。实验报告包括说明书,实验室用的仪器型号,数据,标曲等。
标本要求:
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参? 照此实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5.培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
Elisa试剂盒操作注意事项
1、实验室的环境要干净,防止空气中的一些细菌或粉尘对实验造成干扰。
2、一般的酶联免疫试剂盒中的酶标抗体是以辣根过氧化物酶(hrp)进行标记的。因此要求样本不能含叠氮钠(nan3),因为nan3是hrp的抑制剂。
3、如果样本是血清,应该充分离心,不得有颗粒。
4、试剂盒应在保质期内使用。不同批次的试剂盒中的溶液不得混用。
5、在进行酶联免疫实验之前,应该将试剂盒放置室温平衡30min以上。
6、稀释溶液时,应按照说明书的要求进行精确稀释。尽量选用去离子水或双蒸水进行稀释。
7、要正确使用移液器,吸取液体要精准,枪头上不得留有气泡。吸取不同的液体时,要注意更换枪头。
8、加样时要悬臂加样,避免枪头和孔内液体接触。
9、建议所有的样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。孵育时需将微孔用封板膜或保鲜膜封好,防止水分的蒸发。且封板膜不得重复使用。
10、底物显色剂为tmb,应避免与皮肤接触。终止液为2m浓硫酸,具有腐蚀性,应避免与皮肤接触。
elisa试剂盒
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