基因敲入(Knockin)
基因敲入(Knockin)是在目的基因位置引进特定的突变或外源基因,比如在目的基因引入点突变(模拟人类遗传疾病模型),或将报告基因(如EGFP、RFP、mCherry、YFP、LacZ、Luciferase等)或需要表达的功能性cDNA(如Cre、Dre等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而使报告基因或其他cDNA的表达与目标基因的表达一致。若用报告基因或cDNA取代小鼠本身的基因,则敲除和敲入同时发生。将人源基因替换小鼠内源基因或将人源cDNA插入到小鼠内源基因ATG位置,还可定制人源化小鼠模型。
I ES细胞同源重组技术途径
原理 构建在目标DNA序列位置插入外源cDNA的打靶载体,转入ES细胞,通过同源重组获得Knockin片段重组到基因组指定位置上的ES细胞,经囊胚注射、嵌合鼠繁殖,最终获得Knockin杂合子小鼠。
服务周期 9-16个月
II Crispr/Cas9技术途径
原理 根据基因序列设计合成sgRNA,针对Knockin插入点或点突变位置构建含Knockin片段或点突变的同源序列,与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞质,Cas9核酸酶、sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA,以含Knockin的同源序列为模版修复基因组DNA,最终获得在目的DNA序列插入Knockin片段或点突变的Knockin小鼠。
服务周期 6-9个月
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