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同位素相对标记与绝对定量技术

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最后更新：: 2021-05-16 01:30:02

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同位素相对标记与绝对定量技术 iTRAQ

背景知识： 新泽西医学及牙科大学的蛋白组学研究中心主任Hong Li说：“当我们开始蛋白组学研究时，就采用2D凝胶技术，但得出的信息量却让大伙很失望，因为许多蛋白质已经改变了自身的代谢过程。”而基于高度敏感性和精确性的串联质谱方法，不需要凝胶，就可以获得相对和绝对定量的蛋白质结果。定量蛋白组学是蛋白质组学的一个重要组成部分，即对一对基因组表达的全体蛋白或复杂的混合物体系中所有蛋白质进行定量和鉴定。iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）是美国应用生物系统公司（Applied Biosystems Incorporation，ABI）2004年新开发的一项蛋白定量技术。iTRAQ技术是一种新的、功能强大的可同时对8种样品进行绝对和相对定量研究的方法。技术原理： iTRAQ标记试剂可以与肽段的N端或赖氨酸侧链发生反应，从而完成对肽段的标记。标记完成后混合一个实验组的所有样本，一次可同时处理多达8个不同处理的样本。在进行一级质谱进行母离子选择时，来源于不同标记样本的同一个肽段表现为一个峰，相当于一级质谱强度增强了8倍，有利于鉴定。在进行二级质谱时，iTRAQ试剂在图一所示虚线位置断裂，Balance group发生中性丢失。Reporter group的强度可反映肽段的相对丰度。主要应用： iTRAQ技术应用非常广泛，它是通过200年开发的一种新的同位素标记试剂iTRAQ，结合LC/MS技术已被广泛地应用于细菌、酵母、人体组织、细胞和体液等多种样本的蛋白质鉴定和定量。作为一种新的定量蛋白质组学研究方法，该技术可同时对4种样本进行定量分析并展现高通量、重复性好、敏感性高等特点。iTRAQ技术还可以为我们研究前列腺癌的发生、进展机制，发现新的生物学标记物提供有力的技术平台。iTRAQ技术还可以应用与比较野生型酵母菌株和两种同源突变型酵母菌株xmlv、upflv蛋白质表达差异。同时它可以对多种蛋白混合物或重组的蛋白混合物进行精确地定量。您只需提供：新鲜且足量的样品（组织不少于500 mg，细胞不少于107），或提取的总蛋白（≥ 200 μl）。若提供总蛋白，需满足iTRAQ质检要求我们提供：差异蛋白信息，生物信息学分析结果，完完整的iTRAQ实验报告单等。

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