自噬(Autophagy)是一类细胞内物质降解的代谢过程,待降解的胞内物质首先被自噬小泡包裹,随后被溶酶体中的水解酶降解。研究发现微管相关蛋白轻链3(MAP-LC3),简称LC3,参与了自噬的形成,并被证明了是哺乳动物细胞中常见的自噬小体标记蛋白之一。
Western blot可能会检测到LC3的两种形式,这是由于自噬形成时,胞浆型LC3会酶解掉一小段多肽形成LC3-I,LC3-I跟***脂酰乙醇胺即脑***脂(PE)结合转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),这两种形式在正常细胞中都是存在的,而发生自噬的细胞中LC3-II会有明显的增加。
自噬主要是通过ULK complex***酸化Beclin-1,激活脂酶VPS34,诱导了细胞自噬发生,因此可以通过ULK complex 和Beclin-1的相关基因的抑制剂来抑制自噬的形成,包括的靶点有 MAP kinases, JNK1, ERK 和 p38。同时,细胞自噬还涉及了多种信号通路,如哺乳动物雷帕霉素靶点mTOR信号通路,是依赖mTOR的相关信号通路形成自噬的重要途径。另外,其它信号通路中,如3-甲基腺嘌呤(3-MA)可以通过抑制Class Ⅲ PI3K的活性抑制自噬;GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬;GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬;死亡相关蛋白激酶(death-associated protein linase,DAPK)和DAPK相关蛋白激酶(DAPK-related protein kinase-1,DRP-1)诱导自噬。PKA、casein激酶 Ⅱ、MAP激酶、calcium途径也在自噬错综复杂的调控网格中,但其机制还不甚清楚。
自噬流程图
产品
现货供应LC3 plasmid ,adenovirus and lentivirus(Autophagy)/LC3质粒、慢病毒和腺病毒(细胞自噬)
※GFP-LC3 单荧光自噬指示体系:
利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的原理:无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。但是绿色斑点增多并不一定代表自噬活性增强,也有可能是自噬溶酶体降解途径受阻,可以通过western blot 检测游离的GFP、p62来验证。
※mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系:
用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白,而mRFP是稳定的荧光表达基团,不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬小体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。mRFP是一直稳定表达的,因而可以通过GFP与mRFP的亮点比例来评价自噬流进程。
哺乳动物表达质粒 | ||||
名称 | 描述 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
pGM-CMV-GFP-hLC3 质粒 | Human LC3基因与GFP融合表达哺乳动物表达质粒 | GM-1314P101H | 1ug | 3500 |
慢病毒 | ||||
名称 | 描述 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
pGMLV-GFP-hLC3 慢病毒 | Human LC3基因与GFP融合表达慢病毒颗粒 | GM-1314L201H-S | 50ul*4管(>1*108TU/ml) | 3749 |
GM-1314L201H-M | 50ul*8管(>1*108TU/ml) | 5949 | ||
pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3 慢病毒 | Human LC3基因双标GFP,RFP慢病毒颗粒 | GM-1314L204H-S | 50ul*4管(>1*108TU/ml) | 3749 |
GM-1314L204H-M | 50ul*8管(>1*108TU/ml) | 5949 | ||
腺病毒 | ||||
名称 | 描述 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
pGMAD-CMV-GFP-hLC3 腺病毒 | Human LC3基因与GFP融合表达腺病毒颗粒 | GM-1314R203H-S | 100ul*5管(>1*1010TU/ml) | 3279 |
GM-1314R203H-M | 100ul*10管(>1*1010TU/ml) | 5899 | ||
pGMAD-CMV-RFP-GFP-hLC3 腺病毒 | Human LC3基因双标GFP,RFP腺病毒颗粒 | GM-1314R202H-S | 100ul*5管(>1*1010TU/ml) | 3279 |
GM-1314R202H-M | 100ul*10管(>1*1010TU/ml) | 5899 |
自噬的调控通路
1. 依赖mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶点)途径的自噬
1)PI3K-AKT-mTOR信号通路 2)AMPK-TSC 1/2-mTOR 信号通路
2. 其它的信号通路
1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)通过抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬。
2)beclin1和UVRAG作为正调控子,抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成ClassⅢPI3 复合物调控自噬。
3)GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬;GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬。
4)死亡相关蛋白激酶(death-associated proteinlinase,DAPK)和DAPK相关蛋白激酶(DAPK-related protein kinase-1,DRP-1)诱导自噬。
5)PKA、casein激酶 Ⅱ、MAP激酶、calcium途径也在自噬错综复杂的调控网格中,但其机制还不甚清楚。
自噬相关基因
名称 | 基因功能描述 | Gene ID | 载体 | 规格 | 货号 | 价格(元) |
ANXA1 | Responsible for Protein Targeting to Membrane;CDS | NM_000700.1 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC001 | 询价 |
ATG3 | Responsible for Protein Transport;Involved in Protein Ubiquitination | NM_022488.3 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC002 | 询价 |
ATG4A | Autophagic Vacuole Formation;Responsible for Protein TransportProtease Activity | NM_052936.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC003 | 询价 |
ATG4B | Autophagic Vacuole Formation;Responsible for Protein Transport;Protease Activity | NM_013325 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC004 | 询价 |
ATG5 | Autophagic Vacuole Formation;Co-Regulators of Autophagy and Apoptosis | NM_001286106 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC005 | 询价 |
ATG7 | Responsible for Protein Transport;Involved in Protein Ubiquitination | NM_006395.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC006 | 询价 |
ATG10 | Responsible for Protein Transport | NM_031482 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC007 | 询价 |
ATG12 | Involved in Autophagic Vacuole Formation;Co-Regulators of Autophagy and Apoptosis | NM_004707.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC008 | 询价 |
ATG13 | Autophagy in Response to Other Intracellular Signals | NM_014741.3 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC009 | 询价 |
ATG14 | Autophagy in Response to Other Intracellular Signals | NM_014924.3 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC010 | 询价 |
ATG16L1 | Involved in Autophagic Vacuole Formation;Responsible for Protein Transport | NM_030803.6 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC011 | 询价 |
BECN1 | Involved in Autophagic Vacuole Formation;Co-Regulators of Autophagy and Apoptosis | NM_003766 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC012 | 询价 |
RB1CC1 |
| NM_014781 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC013 | 询价 |
GABARAPL1 | Involved in Autophagic Vacuole Formation | NM_031412.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC014 | 询价 |
IRGM | Involved in Autophagic Vacuole Formation | NM_001145805 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC015 | 询价 |
LAMP2 |
| NM_002294.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC016 | 询价 |
LC3A | Involved in Autophagic Vacuole Formation | NM_032514.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC017 | 询价 |
LC3B | Involved in Autophagic Vacuole Formation | NM_022818.4 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC018 | 询价 |
LRSAM1 |
| NM_138361.5 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC019 | 询价 |
RAB7A |
| NM_004637.5 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC020 | 询价 |
ULK2 | Autophagy in Response to Other Intracellular Signals | NM_014683 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC021 | 询价 |
UVRAG | Autophagy in Response to Other Intracellular Signals | BC064837 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC022 | 询价 |
VPS15(PIK3R4) | Autophagy in Response to Other Intracellular Signals | NM_014602.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC023 | 询价 |
VPS34(PIK3C3) | Autophagy in Response to Other Intracellular Signals | NM_002647.2 | PCDNA3 | 1ug | GM-LC024 | 询价 |
细胞自噬相关的小分子抑制剂系列
细胞自噬是细胞通过自身形成的自噬囊泡,吞噬胞浆内变性蛋白质和细胞器,通过微管相关蛋白,以动力依赖性的方式转运至溶酶体降解的过程,同时它也可以将细胞内的微生物致病体移除出去。
自噬主要是通过ULK complex***酸化Beclin-1,激活脂酶VPS34,诱导了细胞自噬发生,因此可以通过ULK complex 和Beclin-1的相关基因的抑制剂来抑制自噬的形成,包括的靶点有 MAP kinases, JNK1, ERK 和 p38。同时,细胞自噬还涉及了多种信号通路,如哺乳动物雷帕霉素靶点mTOR信号通路,是依赖mTOR的相关信号通路形成自噬的重要途径。另外,其它信号通路中,如3-甲基腺嘌呤(3-MA)可以通过抑制Class Ⅲ PI3K的活性抑制自噬;GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬;GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬;死亡相关蛋白激酶(death-associated protein linase,DAPK)和DAPK相关蛋白激酶(DAPK-related protein kinase-1,DRP-1)诱导自噬。PKA、casein激酶 Ⅱ、MAP激酶、calcium途径也在自噬错综复杂的调控网格中,但其机制还不甚清楚。
自噬抑制剂
Inhibitors of Beclin1 | ||||
名称 | 描述 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
SP600125 | 一种广谱JNK抑制剂,作用于JNK1, JNK2和JNK3时,IC50分别为40 nM, 40 nM和90 nM。 | GM-14GC001(10) | 10mg | 1249 |
GM-14GC001(50) | 50mg | 3899 | ||
GM-14GC001(100) | 100mg | 5159 | ||
U0126 | 一种高度选择性的MEK1/2抑制剂,IC50为0.07 μM/0.06 μM。 | GM-14GC002(5) | 5mg | 839 |
GM-14GC002(25) | 25mg | 1239 | ||
GM-14GC002(50) | 50mg | 2189 | ||
GM-14GC002(100) | 100mg | 3939 | ||
GM-14GC002(500) | 500MG | 10649 | ||
GM-14GC002(1G) | 1G | 14889 | ||
Inhibitors of autophagosome / autophagolysosome formation | ||||
名称 | 描述 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
3-Methyladenine3-甲基腺嘌呤 | 一种选择性PI3K抑制剂,作用于Vps34和PI3Kγ,IC50分别为25 μM和60 μM。 | GM-14GC003(10) | 10mg | 429 |
GM-14GC003(50) | 50mg | 1369 | ||
GM-14GC003(100) | 100mg | 2159 | ||
Chloroquine diphosphate salt 氯喹 二***酸盐 | 一种4-氨基喹啉的抗疟疾和抗风湿药剂。 | GM-14GC004(500) | 500MG | 599 |
GM-14GC004(1G) | 1g | 1029 | ||
GM-14GC004(5G) | 5g | 1949 | ||
SB 202190 (SB202190,FHPI) | 一种有效的p38 MAPK抑制剂,靶向作用于p38α/β,IC50为50 nM/100 nM。 | GM-14GC005(25) | 25mg | 1249 |
GM-14GC005(50) | 50mg | 2139 | ||
GM-14GC005(100) | 100mg | 3039 | ||
Wortmannin (KY 12420,Antibiotic SL-2052)渥曼青霉素 | 一种PI3K抑制剂,IC50为3 nM,抑制自噬体的形成。 | GM-14GC006(1) | 1mg | 439 |
GM-14GC006(10) | 10mg | 2449 |
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