基因过表达小鼠,是指将目的DNA片段构建到过表达载体中,然后通过受精卵的原核注射,将其整合到小鼠的基因组DNA上,从而实现该DNA片段的过量表达的实验过程。
依据实验目标和转入DNA片段的不同,主要可以分为以下几种类型:
a) 过表达小鼠
主要目的是实现目的基因的过表达,其过表达载体的结构如下:
依据启动子的强弱、特异性等特性的选择,可以控制目的基因过表达的强弱和组织(器官)特异性。也可以在目的基因上加入特定的标签(Tag)或荧光蛋白(如EGFP),方便检测、示踪或纯化。
b) RNAi小鼠
通常采用U6/H1启动子启动shRNA的表达,在基因表达的过程中,通过shRNA的干扰作用,达到对目的基因表达的沉默抑制,实现对基因功能的研究。
c) MicroRNA小鼠
通过构建上面两种miRNA载体,可以实现过表达或者抑制。
d) 可诱导性小鼠
通过构建上述结构的载体,并通过原核注射受精卵转入小鼠体内。这种情况下,小鼠在出生和发育时,该基因正常表达。只有与CreER小鼠杂交以后,然后在Tamoxifen诱导下,Cre酶将两个LoxP之间的Stop元件切除,目的基因实现过表达。
构建基因过表达小鼠的实验流程:(2-4个月)