产品说明
甘油(又称丙三醇, C3H5(OH)3)广泛应用于食品,饮料和药物配方中。它也是生物柴油生产中主要的副产品。简单,直接,自动化的甘油浓度测定得到了广泛的应用。本公司生产的甘油试剂盒仅需添加含有甘油激酶,甘油***酸氧化酶和显色剂的单一工作试剂。其吸光强度(570nm) 或荧光强度(lem/ex = 585/530 nm)与样品中的甘油浓度成正比。
产品特点
灵敏、准确:仅需10 μL样品,96孔板测试范围10 – 1000 μM (92 mg/dL-9.2 mg/dL)(比色法)或2 – 50 μM (荧光法)。
简单、方便: 仅需添加单一工作试剂和室温培养20分钟的步骤 , 适合高通量测试。
试剂稳定:优化后的测定法大大提高了试剂和信号的稳定性。
适用范围
直接检测:生物样品(如血清和血浆)中甘油的含量。
药品/药理学:药物对甘油代谢的影响。
食品、饮料: 食品、饮料和药物配方中的甘油。
试剂盒组成(96孔板供200份测试)
缓冲液: 24 mL 酶试剂: 500 mL ATP: 250 mL
显色剂:220 mL 标准液: 100 mL 100 mM甘油
贮存条件: 干冰上运输,缓冲液在4°C下保存,其余试剂在 -20°C保存。保质期3个月。
注意事项: 本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
比色法检测步骤
注:含有-SH基团的试剂(如***,DTT)可能会影响该测试,应当在样品制备时避免。
1. 将所有试剂放置至室温。将解冻的酶试剂放在冰箱内或冰上。按照下表比例,用蒸馏水稀释标准品(将稀释后的标准品冷却储藏以备日后使用)。
No | 标准品 + H2O | Vol (mL) | 甘油 (mM) |
1 | 10 mL + 990 mL | 1000 | 1.0 |
2 | 6 mL + 994 mL | 1000 | 0.6 |
3 | 3 mL + 997 mL | 1000 | 0.3 |
4 | 0 mL + 1000 mL | 1000 | 0 |
将10 mL 标准品和10 mL 样品分别加入透明平底96孔板中。
2. 对每个反应孔,按100 mL 缓冲液,2 mL 酶试剂, 1 mL ATP 和 1 mL 显色剂混合,准备足够工作试剂。 该工作试剂应现配现用。将100 mL 工作试剂加入每个孔中,轻敲孔板使其混匀。
3. 室温下培养20分钟。读取570nm (550-585nm)处吸光度。
注:若样品的吸光度大于1.0 mM标准品的吸光度,需用水稀释样品并重复检测,结果需乘稀释系数 (n)。
浓度计算
用标准品的吸光度减去空白对照(水,4号),对标准品浓度作图并得出斜率。样品的甘油浓度计算如下:
ODSAMPLE 和 ODH2O 分别是样品和水的吸光度值。
单位换算:1 mM 甘油相当于 9.2 mg/dL, 92 ppm。
荧光法检测步骤
对荧光法,线性测试范围是2 - 50 mM甘油。将10 mL 100 mM 标准品和 990 mL 水混合 (终浓度为 1 mM)。
No | 1 mM 标准品 + H2O | Vol (mL) | 甘油(mM) |
1 | 50 mL + 950 mL | 1000 | 0.050 |
2 | 30 mL + 970 mL | 1000 | 0.030 |
3 | 15 mL + 985 mL | 1000 | 0.015 |
4 | 0 mL +1000 mL | 1000 | 0 |
按照上表稀释标准品。将10 mL 标准品和10 mL 样品分别加入黑色96孔板的孔中。
再加入100 mL 工作试剂 (见比色法)。轻敲孔板使其混合。
室温下培养20分钟,读取 lex = 530nm 和 lem = 585nm处荧光强度。样品的甘油浓度计算如下:
实验必需品(未提供)
吸液用仪器、离心管、透明平底96孔板、吸光度分析仪;黑色平底96孔板、荧光分析仪。
甘油标准曲线 |
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