产品说明
谷胱甘肽是由甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸构成的三肽。在血红细胞里,还原型谷胱甘肽对于维持还原态血红素和保护细胞免于氧化非常重要。谷胱甘肽参与谷胱甘肽氧化酶去除过氧化氢毒性的过程。在谷胱甘肽的代谢中,缺乏葡萄糖***酸脱氢酶、谷胱甘肽合成酶或谷胱甘肽还原酶等主要酶的作用,会造成谷胱甘肽的含量降低。
在科研和药物研发中,方便、直接、自动化的还原型谷胱甘肽浓度检测手段是最为理想的。本公司研制的谷胱甘肽检测试剂盒用于从生物样本中准确的检测还原型谷胱甘肽。测试采用改良的5,5’-二硫基-双(2-*****甲酸)(DTNB)法,通过一种试剂(试剂A)完成去除蛋白质和检测过程,并利用DTNB能与还原型谷胱甘肽反应产生黄色产物特性,在波长为412nm下检测,其吸光度与样本中谷胱甘肽的含量对成正比。产品通过配方改良,拥有很长的保质期,并避免了浑浊样品对检测的干扰。
产品特点:
测量敏感、准确:在96孔板中测试,谷胱甘肽的线性测试范围在0.4μM 到100μM之间。
操作简便:整个测试过程是将样本与DTNB试剂混合,去除蛋白质沉淀,然后加入第二种试剂并检测吸光度。
受干扰小:不会受到氨基酸和常用缓冲剂的干扰。
产品用途:
1.直接检测全血、血清、血浆、尿液、组织和细胞提取物中的还原型谷胱甘肽含量。
2.适用于新药开发和药理学研究,检测药物对谷胱甘肽代谢的影响。
试剂盒规格(采用96孔板可测试250份样本):
试剂A:30 mL 试剂B:30 mL
校准品:10 mL (相当于100 μM谷胱甘肽)
储藏条件:可在室温下运输。试剂在4°C环境下保存,保质期六个月。
预防措施:试剂仅用于实验研究,使用过程中请遵循普通的实验室试剂安全措施,详细说明请查阅产品MSDS。
样本制备:
注意:使用前须置试剂至室温,并充分摇匀试剂A。
全血样本需用水稀释20倍(n = 20)。按以下步骤制备细胞裂解液:在4°C、1000g下离心收集2x106个细胞,用冷PBS溶液清洗,并在1-2毫升含有50 mM MES(或***酸盐 pH 6-7)和1 mM EDTA的冷缓冲剂中,通过细胞匀浆或超声波降解法溶解细胞。在4°C、10000g下离心15分钟,取上清液进行检测。
备注:β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、半胱氨酸会干扰检测,在样本准备中应避免接触。氨基酸不会产生干扰。
96孔板测试步骤:
1. 空白对照和校准品:将100μL水和100μL校准品放入透明平底96孔板,并分别加入200μL水。
2. 样本:全血样本需用水稀释20倍(n = 20)。生物样本须去除蛋白质沉淀。在1.5mL离心管中混合120μL样本和120μL试 剂A,充分混合。如果出现浑浊,在转速14000rpm下离心5分钟。如果没有出现浑浊,则无需离心步骤。
3. 取200μL样本/试剂A混合物放入96孔板的孔中,加入100μL的试剂B,轻敲使其混合。
4. 室温下反应25分钟,在400-450nm的波长下读取OD值(峰值在412nm)。
比色皿检测步骤
混合400μL的样本和400 μL的试剂A ,若出现沉淀则需离心。取600 μL上清液与400 μL试剂B混合,室温下反应25分钟,在412 nm的波长下读取OD值。将400 μL校准液和800 μL的水放入干净的比色皿中,读取OD值。
计算:谷胱甘肽的浓度为
OD样本, OD空白对照 和 OD校准品 分别是样本、空白对照(溶解样本的水或缓冲液)和校准品的吸光度,n是稀释因数。
单位换算: 1mg/dL谷胱甘肽= 32.5μM=0.001%=10ppm
实验必需品(未提供):
吸液用仪器.、离心管、离心机
1.采用96孔板测试:透明平底96孔板、微孔板分析仪
2.采用比色皿测试:比色皿、分光光度仪