脂肪分解测试盒

 
产品说明
肥胖症是一种慢性疾病，其起因是过剩的能量以脂肪组织的形式在体内堆积，而过度肥胖容易引发二型糖尿病，心血管疾病以及癌症等疾病。脂肪水解是指在脂肪代谢过程中，通过分解甘油三酯，使其转变为甘油和游离脂肪酸的过程。快速、准确地量化细胞脂解作用，在科研和药物研究中应用十分广泛。本公司所生产的脂肪水解测试盒通过加入一种工作试剂，可直接对脂解过程中释放的甘油量进行检测。产物的颜色强度或萤光强度与样品中甘油的浓度成正比。
产品特点
灵敏、准确：检测只需10 μL样本。甘油的线性检测范围：比色法0.92 - 100 μg /mL (10 -1000 μM)；荧光法0.2 – 5 μg /mL (2 - 50 μM)。
简便、快速：整个检测过程只需加入一种工作试剂，并在室温下反应20分钟。
高通量：在570nm条件下，极大地降低了药物的潜在干扰，并能兼容培养基中的酚红。检测适用96孔板或384孔板。
适用范围
1. 能够直接检测细胞培养物内的甘油含量，从而分析脂肪水解程度。
2. 在药物和药理研究中，检测药品对脂肪水解的影响。
试剂盒组成(96孔板供200份测试)：
缓冲液：  24 mL             酶试剂：500 μL     
ATP：    250 μL              显色剂：250 μL      
标准品：100 μL 100 mM 甘油
储藏条件：试剂盒需冷藏运输，缓冲液在4°C贮存，其他试剂在-20°C 贮存，保质期3个月。
预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
比色法检测步骤
样品中应避免含有-SH基团的干扰试剂(如***，DTT)。检测前， 将所有试剂放置至室温。在检测过程中将解冻的酶试剂置冰上或冰箱内保存。
1．细胞培养：将细胞(如前脂肪细胞，脂肪细胞等)置于培养板内(24孔板，96孔板或384孔板)培养。如需进行药物试验，则用待测药物处理细胞并培养相应时间(注：细胞及待测药物须自行准备，本试剂盒并未提供)。
2．标准品与样品：将10 μL甘油(100 mM)与910 μL培养基(与细胞培养相同)混合，得到100 μg/mL的标准品。按下表比例稀释标准品，并各取10 μL放入透明平底的96孔板中(或取5 μL放入384孔板中)。
编号
100μg/mL标准品+培养基
容量
甘油含量
1
400μL +      0μL
400 μL
100 μg/mL
2
         300μL + 200μL
500 μL
  60 μg/mL
3
         150μL + 350μL
500 μL
  30 μg/mL
4
             0μL + 500μL
500 μL
0
  从细胞培养孔中收集上清液(样品需立即检测或于-20°C 贮藏)，
取10 μL样品(或5 μL用于384孔板)，放入检测板上的不同孔中。
3．显色反应：取洁净试管，按如下比例为每检测孔配制足量的工作试剂：100μL缓冲液，2μL酶试剂，1μL ATP，1μL染色剂。将100μL工作试剂加入各检测孔(或50μL于384孔板)，轻拍使其混合。
4. 室温下反应20分钟后，在570nm (550-585nm)下读取吸光度。
荧光法检测步骤
标准品：仿比色法稀释标准品，并各取10μL与190μL蒸馏水混合。混合后的甘油浓度分别为5.0、3.0、1.5 和 0 μg/mL。
样本：取10μL 细胞培养上清液，加入190μL 蒸馏水稀释(稀释系数为 n = 20)。
取 5μL 稀释后的标准品与样品，放入黑色96孔板或384孔板的不同的孔中。加入50μL 工作试剂，轻拍使其混合。室温下反应20分钟，在lex = 530nm 和 lem = 585nm下读取荧光值。
浓度计算：
用标准品的值R标准品 减去空白对照值R空白(缓冲液，4号)，对标准品浓度作图得出斜率。样品的甘油浓度计算如下,
备注：若计算出样品的甘油浓度高于标准品，需用水稀释样品并重复检测，结果需乘稀释系数(n)。
实验必需品(未提供)：吸量管、离心管、适当的96孔或384孔板、微孔板分析仪。
实心圆：无酚红的培养液；空心圆：含酚红的培养液。
96-well colorimetric assay
96-well fluorimetric assay
参考文献
[1]. Duncan RE, et al. (2007). Regulation of lipolysis in adipocytes. Annu Rev Nutr. 27:79-101.
[2]. Moller F, Roomi MW. (1974). An enzymatic, spectrophotometric glycerol assay with increased basic sensitivity. Anal Biochem. 59(1):248-58. 
[3]. MacRae AR. (1977). A semi-automated enzymatic assay for free glycerol and triglycerides in serum or plasma. Clin Biochem. 10(1):16-9.