我们公司生产的国际领先的纳米磁珠及独特的试剂盒适用于从多种生物样品中快速提取总RNA。使用本试剂盒可以从少量(0.02-0.2g左右)样品中提取几到几十微克完整性好的总RNA, 提取到的RNA可用于northern, primer extension, RT-PCR,体外翻译,S1酶切图谱,第二代核酸测序,生物芯片等应用。提取过程中不需要抽真空或反复离心,节约您宝贵时间,耗材及经费。不用***酚、氯仿、异戊醇,免去您接触有毒、有害试剂。 温馨提示:RNA的得率与样品的类型、储存条件、储存时间长短等有很大关系。
以下符合RNA制备标准的试剂、器皿需操作者提前准备:
v 无水乙醇,分析纯异丙醇(IPA),β-***,DNaseI(optional)
v 1-1000ul移液枪及枪头,1.5 ml离心管,磁力分离架,旋涡混合器,高速离心机,研磨棒
v 50-70 oC 水浴;如发现GR11 试剂有浑浊,在37-70 oC水浴中加热几分钟溶解即可
第一次使用试剂盒需配制的溶液:
1. 加15 毫升分析纯异丙醇到RWB11试剂瓶里,混均,并在瓶盖上打勾
2. 加21 毫升无水乙醇到RWB22试剂瓶里,混均,并在瓶盖上打勾
1) Lysis Cell and Remove Protein/Polysaccharide- 请按 RNA 制备标准操作
加 200ul 50oC 预热的 GR11 和 5ul*** 到 1.5ml 不含RNA 酶的离心管
称取 20-200mg 生物材料,快速放到上步离心管,用玻璃棒在离心管内挤压充分研磨(关系到RNA得率)
加 400ul 50oC 预热的 GR11 到上步 1.5ml离心管(干材料需多加 1/3V GR11)
50-70oC, 5-20 min (裂解时间取决于所用材料)
加 120 ul GR22, 120 ul 无水乙醇,混匀,室温 5-10分钟
13k rpm, 3分钟
2) Bind RNA to RNA Nano Beads(RNB)
取约 650 ul上清液到新的不含RNA 酶的 1.5ml 离心管中 [不要取到下面的沉淀]
加一倍体积 650 ul 的 IPA 到上步的离心管
加 30ul 刚混匀的 RNB 磁珠到上步的离心管,混匀,室温 5-10 min, 混匀
把上步的离心管放到磁力分离架上 3-5min, 弃干净上清
3) Purify RNA
加 500 ul RWB11 到上步的离心管, 混匀
放到磁力分离架上,1-3 min, 弃干净上清
加 500 ul RWB22 到上步的离心管,混均
放到磁力分离架上,1-3 min, 弃干净上清
风干 1-3 min
4) Release RNA
加 200 (50-200) ul REB 到上步的离心管, 混匀
室温 5-10 min, 混匀
放到磁力分离器上,3-5分钟
把上清液转到没有 RNase 的干净离心管里,注意不要取到磁珠
如果需要做DNA 消化,可直接到下一步 5)Remove DNA。否则可在此步测试RNA 样品。
5) Remove DNA (optional)
DNaseI 的用量取决于DNA含量及DNase 的活性,可参照下述方法去除 DNA。
在不含 RNA酶的离心管中加入以下试剂:
混匀, 室温 10 min
70oC,5 min
每个胶孔加 2-5ul RNA 溶液 跑 1.5% 胶检测核酸;RNA 保存在-20 oC 或 -80 oC
DNase 酶处理后的 RNA 可用于 RT-PCR, real time PCR 等 对DNA敏感的 RNA分子生物学应用。