抗体纯化介质--Protein G填料

Protein G亲和介质（Protein G QZT 4FF）产品说明书1. 产品简介Protein G能特异性地与抗体的Fc区结合，所以Protein G亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。Protein G QZT 4FF亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组Protein G为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便，应用广泛。2. 产品特性Protein G QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性如表1所示。表1 Protein G QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性参数指标基质4%交联琼脂糖凝胶配基r-Protein G形状球形介质平均粒径90 μm (45-165)配基密度~3 mg Protein G/ml wet gel动态载量20-25 mg h-IgG/ml wet gel最高流速（25℃）300 cm/h推荐流速<150 cm/h="" 最高耐压="" 0.3="" mpa="" (3="" bar)="" ph稳定性="" 3-10（长时间）；2-11（短时间）="" 保存="" 4-8="" oc（20%乙醇）="" 3.="" 使用方法="" protein="" g="" qzt="" 4ff广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。="" 平衡：用5~10cv的平衡缓冲液（20="" mm="" pb+0.15m="" nacl，ph="" 7.0，添加适当浓度的nacl抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和ph不变（与平衡液一致）。="" 　　进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。="" 　　淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。="" 洗脱：用洗脱缓冲液（20="" mm柠檬酸，ph="" 2.5-3.5；或0.1m甘氨酸，ph="" 3.0；或20="" mm乙酸钠，ph="" 3.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和ph或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1m="" tris/hcl,="" ph="" 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的ph，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。="" 　　再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。="" （1）用0.1m的乙酸或0.1m的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5cv，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；="" （2）也可用70%乙醇或6m盐酸胍淋洗柱子3-5cv，并用3~10="" cv的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。="" 　　其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。="" 4.="" 具体应用="" 1="" 载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3mg/ml）进行载量分析（柱体积2ml；buffer="" a：20="" mm="" pb+0.15m="" nacl，ph="" 7.0，buffer="" b：0.1m甘氨酸，ph="" 3.0；流速：0.5ml/min；上样量：25ml），层析谱图如图1（a：本中心介质；b：进口介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相当，均在20-25mg="" h-igg/ml介质之间。="" 2="" 纯化效果分析：利用小鼠腹水（buffer="" a稀释4倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积2ml；buffer="" a：20="" mm="" pb+0.15m="" nacl，ph="" 7.0，buffer="" b：20mm柠檬酸，ph="" 3.0；流速：0.5ml/min；上样量：4ml），层析谱图如图2所示，纯度分析结果表明，经过一步亲和层析，即可得到纯度95%以上的igg（图3）。="" 图1="" h-igg在protein="" g介质上的动态穿透曲线（a：本中心介质；b：对照介质）="" 图2="" protein="" g亲和层析谱图（小鼠腹水）="" 图3="" 小鼠腹水经protein="" g纯化所得igg产品的高效液相（superdex="" 200）分析谱图（a：本中心protein="" g介质；b：对照protein="" g介质）="" 5="" 特色服务="" （1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。="" （2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。="" （3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。="" （4）为客户提供专业的售前和售后服务。="">