德国维润麻疹病毒检测试剂盒说明书

德国维润麻疹抗体检测试剂  德国维润赛润研发有限公司有非常清晰的企业经营体系：自 1978 年成立以来，我们就致力于研制提供精确的治疗传染病的诊断试剂盒。这一目标的实现，要求先进的诊断方法不断被改进和发展，因为有效的治疗措施首先依赖于及时精确的诊断技术。而在公司总部所在地维尔茨堡市，七十多位优秀的专业人员正运用他们精湛的专业技术进行持续不断地潜心研究。

     在多项疾病联合诊断方面，在秉承“准确、及时”的方针基础上，开发出新的、更省时的、性价比更优异的独家产品。

德国维润麻疹抗体检测试剂针对不断出现的令人卒不及防的非典型性传染病，公司建立了专业研究室，并与欧盟、全球研究机构以及相关国家政府合作，探索快速反应机制，研发诊断试剂盒，并可针对这些疾病的疫苗接种进行监测。

德国维润麻疹抗体检测试剂公司作为体外诊断学领域的权威机构，是您忠实可靠的伙伴。

请您信赖我们 25 年的科研经验。

    赛润 ELISA classic 试剂可以对人体 IgG, IgM, IgA 抗体进行检测。优质的抗原是保证产品高质量的前提。单点定量法是一种非常经济有效的方法，当检测样品数量较少时仍可以进行有效的检测。试剂盒的试剂具有可交换使用性，并且具有完全统一的检测程序，所以试剂盒可以适用于大部分的 ELISA 自动检测仪器。

1. 名称

通用名：麻疹病毒 IgG试剂盒 (定量)     

英文名：Masern Virus IgG (quant.)

商品名：赛润ELISA classic 麻疹病毒 IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）

汉语拼音：Serion ELISA classic Mazhenbingdu IgG kangti dingliang jiance shijihe (meilian mianyifa)   

产品编号:  ESR102G 

检测评估标准: Dade Behring BEP ® III / BEP ® 2000, DSX, 手动操作

2．用途

用于定量测定人血清、脑脊液或血浆中的抗麻疹病毒抗体。

3. 诊断意义  

赛润ELISA classic 麻疹病毒 IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）主要用于定量检测人血清、脑脊髓液或血浆中抗麻疹病毒的抗体。IgM酶免疫分析的阳性结果表明是急性感染，IgG检测则用于评估机体的免疫状态以及检测鞘膜内免疫球蛋白的合成情况。 

麻疹病毒，与腮腺炎病毒、副流感病毒和呼吸道合疱体病毒一样，也属于副粘病毒科。麻疹病毒是一种在全世界范围内传播的病原体，据WHO估算全世界每年有100万人死于麻疹病毒感染，WHO各成员国及其它许多国家都在积极通过疫苗接种，力图消灭麻疹病毒。 

由于麻疹病毒具有很强的传染性（阳性检出率为99%），“麻疹”是儿童时代的一种典型疾病，在实行疫苗接种之前，10岁以内儿童的感染率为95-98 %，实行疫苗接种之后该病的流行病学特征逐渐发生变化，疾病的发作可能会延迟到学生时期或青少年阶段。 

感染在全年内都有发生，但多数感染发生在秋冬季节。病毒可以通过与被感染者亲密接触而传播，主要是飞沫传播，病毒进入体内的途径是上呼吸道。一旦被感染（有临床表现或无症状）都会获得终生的免疫力。 

经过10-12天的潜伏期后，在前驱期内60-70%患者的口腔粘膜上会出现所谓的科泼力克斑（Koplik´s spots），这是麻疹病毒感染的特异体征。在前驱期内，类似流感的症状会变得很严重，直至随着发烧的急剧加重而出现麻疹。麻疹会从面部扩散到躯干，进而发展到肢体末端。经过几天的疾病发作高潮之后，通常会很快康复。 

除了这种典型的疾病发作过程之外，约有五分之一的病人会出现并发症，病症会因人而异，常见的有肺炎和脑炎。在发展中国家，伴有腹泻的麻疹病毒感染被认为是该病死亡率高的主要原因。少数病例的晚期并发症是麻疹-亚急性巩膜炎及全脑炎（即麻疹- 亚急性硬化性全脑炎[SSPE]）。 

可以采用单一疫苗或联合疫苗如麻疹-腮腺炎疫苗或麻疹-腮腺炎-风疹疫苗进行接种。活疫苗（减毒的病毒株）可以使机体产生多方面的免疫力。建议被接种的婴幼儿应大于15个月。 

感染后4天内可使用γ-球蛋白（丙种球蛋白）预防疾病的发作，它能够减轻疾病发作的症状。 

通过咽部拭子的病毒检测、或血清学IgM特异性抗体检测或血清转化都可以确定麻疹病毒的感染，PCR试验完善了经典的试验方法。从出现麻疹第2天后IgM抗体大约可持续4-6周的时间，而IgG抗体会终生存在。 

在实行麻疹疫苗接种的国家，通过试验室方法确定每个病例的感染状况能够为临床诊断提供有力的证据，此外专家们还试图将试验室检测应用于流行病学监测。 

赛润ELISA classic麻疹病毒IgG试剂检测的抗体活性可以用国际单位来表示，因此可以对不同试验室的检测结果进行比较，同时也能够对免疫保护的状况予以解释和说明。 

4. 说明

本说明书除麻疹病毒IgG抗体定量检测的内容外，还涉及到IgM抗体的定量检测，以及对结果的分析等。

5. 赛润ELISA classic - 检验原理

用抗原包被微量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异性地与固相载体中存在的抗原结合，形成免疫复合物。除去多余物质后，加入碱性***酸酶标记的IgG、IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。洗板，除去多余的结合物，加入底物（对********酸盐）。其与酶结合的免疫复合物反应，产生有颜色产物，颜色强度与特异性抗体含量成正比。 

6. 试剂盒的组成 

7. 其它检测所需物质 

-  普通实验室所需的仪器装置 

-  IgM检测: 另需赛润含对照抗原的类风湿因子Rf–吸附剂（Rf–吸附剂/对照抗原；产品编号T200/20ml）  

-  分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米- 690纳米（例如 650纳米） 

-  37℃温箱 

-  湿盒 

-  蒸馏水。 

8. 储存及稳定性 

9. 赛润 ELISA classic的检验步骤 

9.1 注意事项 

只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。 

ELISA classic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。应在未开封的情况下，保存于2-8℃，并在有效期（见标签说明）内使用。详细的稳定性和储存资料在“8. 储存及稳定性”内将加以详述。 

每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。 

在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，避免试剂受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 

请从标记处剪开密封袋。如果铝袋破损或者开启装有干燥剂的铝袋后而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。 

开始试验前，将所有试剂置于室温。 

从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的外面，注意不要盖错瓶盖或管盖。 

试验结果的可重复性依赖于充分混匀试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液（例如使用混合器）。 

小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 

只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。 

如果实验中未严格遵守控制质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。 

 洗涤不充分将影响试验结果： 

应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行。重要的是所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。 

9.2 样本准备储存 

避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检测。 

样品不应加热灭活。 

9.2.1 样品稀释 

开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）： 

赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgG 

稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混匀。 

赛润 ELISA classic麻疹病毒IgM 

类风湿因子抗体是自身IgM型的抗体，可与IgG免疫复合物结合。非特异性风湿因子抗体的存在将导致IgM检测的假阳性结果。另外，也存在弱结合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。 

特别类风湿因子Rf—吸附剂（产品编号T200,20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原，对照抗原同时能与类风湿因子及可识别宿主细胞膜成份的抗体结合。因此，无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。 

在进行以下SERION ELISA classic IgM检测时，此类RF—吸附剂需作为附加试剂另行购买: 

巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒 

首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf-吸附剂/对照抗原)(V1)进行如下稀释： 

然后将患者的待测样品(V1)在此Rf-稀释缓冲液(V3)中进行稀释： 

9.2.2 样品储存 

密封的患者样品可在冰箱中2-8℃保存7天。≤ -20℃可保存更久。 

避免样品反复冻融。 

已稀释的样品可在2-8℃保存一星期。 

9.3 试剂盒反应试剂的准备 

9.3.1 微孔条 

微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔条取下并重新放入铝袋。将袋口折叠2-3次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密封性。 

9.3.2 对照血清 / 标准血清 

对照和标准血清稀释，可直接使用。 

对于每次试验和每批检测体系，无论使用的微量板数目的多少，均应包括阴性阳性对照孔。界定对照应作双份。如果定量试验，标准血清也应作双份。 

不要用Rf-吸附剂处理对照血清！ 

9.3.3  抗人 IgG, IgA 或IgM抗体，用 AP标记（即用） 

禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合使用。同一试剂盒才能达到最佳检测效果。 

9.3.4  洗液 

以1：30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）至体积V2。 

例如： 

9.3.5  样品的稀释缓冲液（即用） 

9.3.6  底物（即用） 

试验时戴手套以避免污染。必须以无菌枪尖吸取底物溶液。 

9.3.7  终止液（即用） 

9.4 检测程序概要 

麻疹病毒IgG / IgM（定量 ）

进行IgM检测时先用类风湿因子吸附剂预处理血清 

     样品稀释液（患者样本） 

                                                  1+100 

↓ 

将稀释的样本，和立即可用的对照血清 / 标准血清，加 

到微量孔内（100微升） 

↓ 

                                           ↓ 

洗涤 

↓ 

加入立即可用的酶标记抗体溶液（100微升） 

↓ 

                                                    ↓ 

                                          洗涤 

 ↓ 

加入底物溶液（100微升） 

↓ 

↓ 

加入终止液（100微升） 

↓ 

9.5  检测过程  

9.5.1  将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张标签。 

9.5.2  在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。 

留一个孔为底物空白使用，例如： 

9.5.3  将样品于湿盒内37℃（±1℃）孵育60分钟（±5分钟）。 

9.5.4  孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板）： 

- 吸去或甩去洗液 

- 每孔内加入300微升洗液 

- 吸去或甩去洗液 

- 重复洗涤过程3次（共4次！） 

- 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体 

9.5.5  加入酶标记抗体。 

于相应孔内（底物空白除外）加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体。 

9.5.6  湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）∗。 

9.5.7  孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上） 

9.5.8  加入底物 

于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔） 

9.5.9  湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）*。 

9.5.10  终止反应 

每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。 

9.5.11  读取消光度 

以底物空白为空白对照液， 60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考波长范围为620纳米-690纳米（例如650纳米）。 

10．检测结果评估 

赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgG/IgM（定量） 

10.1  4PL单点定量法 

通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活性，该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。 

用赛润 ELISA classic试剂检测，抗体浓度可通过逻辑对数模型（4PL, 4个参数）来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。计算公式如下：  

参数A、B、C和 D能够反映曲线的精确形状。 

1. 下端渐进线           参数A 

2. 曲线的斜率           参数B 

3. 曲线的转折点         参数C 

4. 上端渐进线           参数D 

标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司（维尔茨堡市）在严格条件下经过多次试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。 

每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如有需要也可取得相关的评估软件。 

为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保证抗体浓度测定的正确性。标准血清不一定是阳性对照，且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。 

10.2  有效性标准 

-  底物空白的OD值必须 ＜ 0.25 

-  阴性对照必须为阴性 

-  ELISA定量试验：标准血清的平均OD值必须在有效范围内，此范围已在试剂盒专用的质量控制证书中给定（减去底物空白之后！） 

-  ELISA 定性试验：阳性对照的平均OD值必须在有效范围内，此范围已在试剂盒专用的质量控制证书中给定（减去底物空白之后！）  

如果未达到以上标准，则试验无效且必须重做。 

10.3  计算赛润 ELISA classic 麻疹病毒IgG/IgM （定量）

10.3.1 非自动评估 

每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表，因而每一个OD值都可得到一个抗体活性值。标准血清的参考值和有效范围已在评估表格（质量控制证书）中给定。 

所有的OD值在评估前必须先减去空白（A1）。 

方法1：定性评估 

为确定临界值范围，请将已测得标准血清的OD平均值与质量控制证书上给出的数据相乘（见专用公式），例如： 

OD = 0.502 x MW(STD)   临界值上限 

OD = 0.352 x MW(STD)   临界值下限 

∗ 注意：在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。 

如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64, 那么临界值的范围即为 0.225-0.321。 

方法2：用评估表精确评估抗体活性 

1. 计算标准血清两个OD值的平均值，并检查其是否在给定的有效范围内。 

2. 然后，根据标准血清的平均OD值在下表中确定对应的数据栏。 

3. 用已测得的患者样品OD值查出“IU / ml或U / ml”栏中对应的抗体活性。 

例如： 

标准血清/OD范围 

例如：测得的标准血清平均消光度值为0.64，则对应表中OD值0.62-0.65一栏中的数据。如果患者血清样品的OD值为0.23, 对应的抗体活性范围应是20-30。 

方法3：利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。 

测定间差异（指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异）可用校正系数 F 与当前测定数值相乘进行校正。校正系数的计算公式为： 

此步骤对于校正当前检测与批次标准曲线之间的偏差是非常必要的。 

首先，不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数 F 进行校正。 

1. 计算标准血清的两次OD值的平均值，并确认是否在有效范围内。 

2. 校正系数 “F”的计算：用给定的参考数值除以标准血清两次消光数的 

平均值。 

F = 标准血清的参考消光数值 / 标准血清消光数的平均值 

 3. 将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数 “F”相乘。 

4. 用经过校正的消光数值在标准曲线“U/ml或IU/ml”坐标轴上确定对应 

的抗体活性。 

用mIU/ml标明抗体活性是根据“第二国际标准 抗麻疹血清，人类 66/202”。 

此标准是以“每安培5个国际单位”体现的。 

赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgG 活性的计算： 

赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgM 活性的计算： 

针对临界值结果的样品，应在1-2 周后对相应的病人再取样，重新检测。 

10.3.2  利用SERION easy base 4PL软件/SERION评估软件进行自动评估 

输入4个参数和标准血清的参考数值之后，联机软件能够立即自动计算出样品的抗体活性。 

如果标准血清的光密度不在有效范围之内，SERION easy base 4PL软件就会出现下列提示信息： 

“标准已超出允许范围”和 / 或“标准差异大于20%”。（"Standards are not in tolerance range"和/或"Distance between standards is greater than 20 %."） 

SERION评估软件只用英语显示： 

“以下组样品标准值超出允许范围：以下组样品（1-24组）标准值差异大于20%”。（"Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24. Standard value differ more than 20% in following groups: Group 1-24."） 

这种情况下试验是无效的，必须重新进行试验。 

只有更换批号时，参数和参考值才需要改变（评估表中标有参数与参考值），可通过标准血清OD值对应IU/ml or U/mi栏中每组数据检查输入数据的正确性。计算出的平均OD值应与专用证书所列出的活性值相对应，软件可自动校正测定值，使用标准版软件会打印出如下内容：  

10.4 检测结果的说明  

IgM 阳性结果表明是麻疹病毒的急性感染。 

如果病人没有发生急性麻疹病毒感染，IgG抗体阳性则说明有被感染史或疫苗接种成功。免疫活性的临界值设为200 mIU/ml。 

 疫苗接种与病毒感染产生的免疫活性没有显著差别，但与感染相比，疫苗接种后产生抗体的滴度一般会低许多。 

试验使用赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgG试剂，对来自德国南部的223份随机血样进行了检测。检测结果如下： 

大约有58%血清样品的抗体浓度在0-5000 mIU/ml之间，而其他48%的样品其抗体浓度高于5000 mIU/ml。 

在统一后的德国，由于免疫接种率高，抗体浓度平均值则比较低（910-2400 mIU/ml）。 

11. 性能特征 

11.1 可重复性 

检测内结果的可重复性通过在同一批试验中检测20次不同反应的血清来判断，而检测间结果的可重复性通过分别在5天进行10次独立的血清检测分析来判断。 

赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgG: 

赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgM: 

11.2 敏感性和特异性  

IgG: 在一个外部试验中对69份血样进行了不同抗体活性的检测，而在内部试验中也对50份来自健康志愿者的血样进行了检测。使用另一种ELISA商品试剂做对照试验。结果有15份样品在两个试验中呈临界值结果，这些数据不纳入用于计算试验结果的数据中。 

IgM: 另一个试验对86份可疑的麻疹病毒急性感染病人的血样进行了检测，同时采用一种间接ELISA试剂（由在欧洲具有领先技术的一家公司生产）进行对照试验。 

* 有2份血样用赛润ELISA classic试剂检测呈阳性，而在对照试验中呈阴性。两份血样的检测值稍高于临界值，其中一份样品在噬菌斑中和试验中也呈阳性。 

在德国国家检定中心（德国柏林罗伯特-科赫研究所[Robert-Koch-Institute 

[Berlin,Germany]），对88份血样利用麻疹病毒IgM试剂进行了对照试验。试验结果表明：赛润 ELISA classic 麻疹病毒 IgM 试剂有很好的特异性。用EBV/CMV IgM 试剂检测仅有1/10血样的抗体呈现临界值结果。在以另一种间接ELISA试剂为对照的情况下，该试验的敏感性大于95%。 

其中，44份来自健康志愿者的血样中有1份呈现临界值结果，而其它样品，与90份来自怀孕妇女的血样一样，呈阴性。 

12. 有效期

2-8℃贮存，有效期18个月。详见试剂盒包装，具体各部分有效期在“8.储存和稳定性”中详述。

13. 警告

13.1警告和安全措施

赛润 ELISA classic试剂盒是针对熟悉实验室操作人员所设计使用的。 

所有试剂盒试剂及人类标本必须采用已有的良好实验技术，小心处理： 

-  此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 

-  移液过程禁止用口。 

-  在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 

-  使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服，戴安全镜。使用后请彻底洗手清洁。 

-  患者样本及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。 

-  试剂应保存在安全的地方，禁止儿童接触。 

-  终止液：具有腐蚀性（C）；发生酸烧伤（R34）；因此在操作时应穿戴防护镜，手套和试验服。