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ABI PCR封板膜 4311971
Power M-MLV 反转录酶
TaqBeadTM Hot Start Polymerase，1.2
通过松江区市场监管局认证 
260L药品阴凉柜
立式双开门药品阴凉柜
精密鼓风干燥箱
干燥箱/培养箱（两用
真空干燥箱（真空度数
真空干燥箱（微电脑带
精密鼓风干燥箱（液晶
9000鼓风干燥箱
| 编号 | 数量 | 保存 |
| SR-I | 4mL | |
| SR-II | 10mL | |
| SR-Ⅲ | 14mL | |
| TU-1 | 1.5mL | |
| TU-2 | 0.8mL | |
| TU-3 | 250uL | |
| TU-4 | 20uL | |
| TU-5 | 20uL | |
| TU-6 | 20uL | |
| TU-7 | 60uL | |
| TU-8 | 25uL | |
| TU-9 | 20uL | |
| TU-10 | 20uL | |
| T | 500uL | |
【操作步骤】
1.RNA提取
(1) 取疑似病料（空肠、小肠及其内容物等），用Hank’s液或PBS研磨成1：3悬液，在－
（2）取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入200uLSR-I，漩涡振荡混合均匀，静置5min。
（3）加75uL TU-1，漩涡振荡混合均匀，10000r/min离心5 min。
（4）将上清转移到新的2 ml离心管（试剂盒内提供）中，加入300 uL 异丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均匀。
（5）将步骤4中的混合液移入制备管中，并将制备管置于同一2 ml离心管，10000 r/min离心1min。
（6）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加500 uL SR-II，室温静置1min，10000 r/min离心1 min。
（7）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min离心1 min。
（8）将制备管置回到2 ml离心管中，10000 r/min离心1 min。
（9） 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中（试剂盒内提供），在制备管膜中央加40 uL TU-2， 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板，即用或
2.One-Step RT- PCR加样体系
| TU-3 | 12.5uL |
| TU-4 | 1uL |
| TU-5 | 1uL |
| TU-6 | 1uL |
| TU-9 | 1uL |
| TU-10 | 1uL |
| 模 板 | 7.5uL |
3.反应程序
| 第1步 | | 45min | |
| 第2步 第3步 | | 5min |
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| 第4步 | | 1min | 30个循环（3～5步） |
| 第5步 | | 1min |
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| 第6步 | | 6min |
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| 第7步 | | 5min |
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4.电泳
配制1%琼脂糖凝胶，取PCR产物5uL混合1uL TU-8，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加3uLTU-7，在120v 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
| 1 2 |
在约720bp位置出现扩增带，猪传染性胃肠炎检测结果为阳性，在约240bp位置出现扩增带，猪流行性腹泻检测结果为阳性（如图）。
1.DL2000 Marker
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