一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中赭曲霉毒素A的残留量。
二、适用范围
定量检测粮食、饲料等样本中赭曲霉毒素A残留。
三、试剂盒特点及技术指标
* 检 测 时 间 :30min
试剂盒灵敏度: 0.1ppb(µg/kg)
* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值<0.5 ppb;
* 试剂盒提供工作浓度标准品,使用更方便。
试剂盒检测样本的灵敏度和准确度:
样本 | 检测下限 | 回收率 |
谷物、豆类 | 1ppb | 70%-120% |
葡萄干等 | 1 ppb | 70%-120% |
试剂盒特异性:
药物名称 | 交叉反应率(%) |
赭曲霉毒素A | 100% |
呕吐毒素 | <2% |
四、所需材料
仪器:微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平(感量0.01 g)、离心管(5 mL, 50 mL)
微量移液器:单道 1µL~10 µL、10 µL~100µL
多道50µL~300µL
试剂:去离子水
五、 试剂盒组成
| 组成部分 | 96T装量 |
1 | 赭曲霉毒素A酶标板 | 12×8孔 |
2 | 赭曲霉毒素A标准品*6 | 6×1 mL |
3 | 赭曲霉毒素A高浓度标品1ppm | 0.5mL |
4 | 赭曲霉毒素A酶标物 | 13 mL |
5 | 赭曲霉毒素A抗体 | 7mL |
6 | 底物液A液 | 7 mL |
7 | 底物液B液 | 7 mL |
8 | 终 止 液 | 7 mL |
9 | 10×浓缩洗涤液 | 40 mL |
10 | 2×赭曲霉毒素A样品稀释液 | 45 mL |
*注:6个标准品浓度为:0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb, 0.9 ppb, 2.7ppb, 8.1 ppb,直接使用。
六、 酶标免疫测定程序
① 将所需试剂从冷藏环境中取出,待其完全回 升至室温(20~25℃)后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
② 按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
③ 加标准品/样品、抗体:加标准品/样品50µL
到对应的微孔中,加入赭曲霉毒素A酶标物50µL /孔, 再加入赭曲霉毒素A抗体50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。
④ 洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,
加入洗涤工作液250µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,最后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
⑤ 显色:加入底物液A液50µL/孔,再加底物
液B液50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应15~20min。
⑥ 测定:加入终止液50µL/孔,用酶标仪立即 测定450nm处的吸光度值(建议用双波长450/630nm)检测。
七、 结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标,以赭曲霉毒素A标准品浓度(ppb)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中赭曲霉毒素A实际浓度。(详见试剂盒专业分析软件,以便进行大量样本的分析计算。)
八、 注意事项
① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。
② 反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
③ 不使用过了有效期的试剂盒,不交换使用不同批号的试剂。
④ 0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min,反之则减短反应时间。
九、贮藏条件及保存期
贮藏条件: 2~8℃
保 质 期: 12个月