枯草杆菌WB800N菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 枯草杆菌WB800N菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。枯草杆菌WB800N菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
枯草杆菌WB800N菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC768SPC-A-1 人肺腺癌细胞人1640贴壁
EC747RAEC大鼠主动脉血管内皮细胞大鼠1640贴壁
EC748SF767人脑瘤细胞人DMEM贴壁
EC802RSC-364大鼠滑膜细胞大鼠DMEM贴壁
EC749CRFK猫肾细胞猫1640贴壁
EC803NB-4人急性早幼粒白血病细胞人1640悬浮
EC750ME-1人类急性髓细胞性白血病细胞人IMDM悬浮
EC751MKN45人低分化胃癌细胞人1640贴壁
EC752CESS人急性髓系白血病细胞人IMDM悬浮
EC753J-111人单核细胞白血病细胞人1640悬浮
EC804OCI-AML2人类急性髓细胞性白血病人IMDM悬浮
EC805NKM-1人白血病细胞人1640悬浮
EC806NCI-H23人非小细胞肺癌细胞人1640贴壁
EC754ROS17/2.8大鼠成骨细胞大鼠DMEM/F12贴壁
EC755GL261小鼠胶质瘤细胞小鼠DMEM贴壁
EC756RCS大鼠软骨肉瘤细胞大鼠EMEM贴壁
EC807RL人B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞人1640悬浮
EC757DCS人树突状细胞人DMEM贴壁
EC7583LL小鼠肺癌细胞小鼠DMEM贴壁+悬浮
EC769VMM5A人黑色素瘤细胞人1640贴壁
EC770VMM39人黑色素瘤细胞人1640贴壁
EC759A10大鼠主动脉平滑肌细胞大鼠DMEM贴壁
EC771SNU449人肝癌细胞人1640贴壁