大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC385HFL 人成纤维样滑膜细胞人1640贴壁
EC377HLEB3 人晶状体上皮细胞系人DMEM贴壁
EC380HN13 人口腔鳞状细胞癌细胞人EMEM贴壁
EC403RLE-6TN 大鼠肺上皮Ⅱ型细胞大鼠DMEM贴壁
EC382 PA-TU-8988S 人胰腺癌细胞人DMEM贴壁
EC390HEEEC 人正常食管上皮细胞人1640贴壁
EC392MES-SA 人子宫肉瘤细胞人MECECoy’s 5a贴壁
EC393小鼠心肌成纤维细胞小鼠1640贴壁
EC394EHEB 慢性B细胞白血病细胞人1640悬浮
EC383SNK6 人NK/T细胞淋巴瘤细胞人1640悬浮
EC384PIG1 原代正常***肤黑色素细胞人1640贴壁
PIG3 原代白癜风***肤黑色素细胞人无
EC385hTERT-RPE1 人视网膜色素上皮细胞人DMEM贴壁
EC386ARPE-19/APRE-19人视网膜上皮细胞人DMEM贴壁
OP9-DL1 小鼠骨髓基质细胞小鼠无
EC407IPI-2I 猪回肠上皮细胞猪1640贴壁
EC421RT4-D6P2T 大鼠神经雪旺氏细胞大鼠DMEM贴壁
EC396HUVEEC人脐静脉血管内皮细胞人1640贴壁
EC410HTR8-SVneo 人绒毛膜滋养层细胞人1640贴壁
EC411KG-1a 人急性骨髓白血病细胞人IMDM悬浮
EC395OECI-AML3 人急性髓细胞性白血病细胞人IMDM悬浮
EC397bEnd.3 小鼠脑微血管内皮细胞小鼠DMEM贴壁