酿酒酵母AH109菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 酿酒酵母AH109菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。酿酒酵母AH109菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
酿酒酵母AH109菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC772HHFK人毛囊角质细胞人IMDM贴壁
EC809CEL鸡胚肝细胞鸡DMEM贴壁
EC773JS1小鼠肝星形细胞小鼠DMEM贴壁
EC781Cattle chondrocytes牛软骨细胞牛DMEM/F12贴壁
EC780BMEC大鼠脑微血管内皮细胞大鼠DMEM贴壁
EC823OCI-AML5人急性髓细胞性白血病细胞人IMDM悬浮
EC810HBSMC人支气管平滑肌细胞人DMEM贴壁
EC774SDBMSCSD大鼠骨髓间充质干细胞大鼠DMEM贴壁
EC775SNB19人胶质母细胞瘤细胞人DMEM贴壁
EC776SK-LU-1人低分化肺腺癌人EMEM贴壁
EC777NCI-H647人非小细胞肺癌细胞人1640贴壁
EC778HAEC人主动脉内皮细胞人1640贴壁
EC811WRL68人正常肝细胞人1640贴壁
EC782U266B1人外周血B淋巴细胞人1640悬浮
EC783SNU-719人胃癌细胞人1640贴壁
EC812MKN74人胃癌细胞人1640贴壁
EC784HMC人肾小球系膜细胞人DMEM贴壁
EC785HBMEC人脑微血管内皮细胞人DMEM贴壁
EC8153T3-J2小鼠胚胎成纤维细胞小鼠DMEM贴壁
EC787OPM-2人骨髓瘤细胞人IMDM悬浮
EC788NS-1小鼠骨髓瘤细胞小鼠IMDM悬浮
EC789NCI-H446人小细胞肺癌细胞人1640贴壁
EC790NHA人星形胶质细胞人DMEM贴壁
EC791COC1人卵巢癌细胞人1640悬浮
EC792HCGC人小脑颗粒细胞人DMEM贴壁
EC816BEL/FU人血管内皮细胞人DMEM贴壁