酿酒酵母EBY100菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 酿酒酵母EBY100菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。酿酒酵母EBY100菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
酿酒酵母EBY100菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC471GIST-48人胃肠道间质瘤细胞人McCoy’s 5a贴壁
EC794NPA87人甲状腺乳头状癌细胞人F12K/DMEM贴壁
EC795SW837人结直肠腺癌上皮细胞人L15贴壁
EC817SW1463人直肠腺癌细胞人L15贴壁
EC796 Walker/LLC-WRC256大鼠腹水癌细胞大鼠DMEM贴壁
EC797SRA01/04 永生化人晶状体上皮细胞人DMEM贴壁
EC799HPAEpiC人肺泡上皮细胞人DMEM贴壁
EC798MLMEC小鼠微血管内皮细胞小鼠DMEM贴壁
EC800HOP-62人非小细胞肺癌细胞人1640贴壁
EC818HRGEC人肾小球内皮细胞人DMEM贴壁
EC819MAEC小鼠主动脉内皮细胞小鼠DMEM贴壁
EC820MGECs小鼠肾小球内皮细胞小鼠DMEM贴壁
EC821NCI-H660人小细胞肺癌细胞人1640贴壁
EC822Human podocyte人肾足细胞人McCoy’s 5a贴壁
EC823ATDC5小鼠胚胎瘤细胞小鼠DMEM贴壁
EC824DB人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞人1640悬浮
EC830SU-DHL-2人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞人1640悬浮
EC825KOPN-8人前B淋巴瘤细胞人IMDM悬浮
EC826MOPC小鼠少突胶质前体细胞小鼠EMEM贴壁
EC831SIRC兔角膜上皮细胞兔DMEM贴壁
EC827FL62891人肝细胞人1640贴壁
EC828AZ521人胃癌细胞人1640贴壁
EC829MTEC1小鼠胸腺上皮细胞小鼠1640贴壁
EC8321301人淋巴细胞人1640悬浮
EC833SUP-T1人T淋巴母细胞瘤细胞人1640悬浮
EC834IMR-90人胚肺成纤维细胞人DMEM贴壁
EC841MX-1人乳腺癌细胞人1640贴壁