枯草杆菌BS168菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 枯草杆菌BS168菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。枯草杆菌BS168菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
枯草杆菌BS168菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC692C1498小鼠急性淋巴瘤细胞小鼠DMEM悬浮
EC693SNU878人肝癌细胞人1640贴壁
EC694SNU886人肝癌细胞人1640贴壁
EC708NCI-H1417人小细胞肺癌细胞人1640贴壁
EC695HNSC人神经干细胞人DMEM贴壁
EC7092BS人胚肺成纤维细胞人EMEM贴壁
EC710HIBEpiC人肝内胆管上皮细胞人1640贴壁
EC711hUC-MSC人脐带间充质干细胞人DMEM贴壁
EC696MBT-2小鼠膀胱癌细胞小鼠1640贴壁
EC69832D Clone3小鼠骨髓淋巴母细胞小鼠DMEM贴壁
EC699A-72犬癌细胞犬1640贴壁
EC712BaF3小鼠原B细胞小鼠IMDM悬浮
EC435IR983F大鼠骨髓瘤细胞大鼠IMDM悬浮
EC713SF9昆虫卵巢细胞昆虫Graces Insect medium悬浮+贴壁
EC714Ishikawa人子宫内膜癌细胞人EMEM贴壁
EC738HCEC人角膜上皮细胞人1640贴壁
EC715HCC1500人乳腺管癌细胞人DMEM贴壁
EC716Th17小鼠辅助性T细胞小鼠1640悬浮
EC717Tregs小鼠调节T细胞小鼠1640悬浮
EC718HM1900人小胶质细胞人DMEM贴壁
EC719NIT-1小鼠胰岛素瘤β细胞小鼠DMEM贴壁
EC750NCI-H187人视网膜母细胞瘤细胞人1640悬浮
EC721MARC-145猴肾细胞猴DMEM贴壁
EC722ROMAS人Burkkit淋巴瘤细胞人1640悬浮
EC723TH1小鼠调节T细胞小鼠1640悬浮
EC724PT67小鼠逆转录病毒包装细胞小鼠DMEM贴壁
EC725OCI-AML4人急性髓系白血病细胞人IMDM悬浮