大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC147T84人结肠腺癌肺转移细胞人DMEM贴壁
EC148COLO 320DM 人结直肠腺癌细胞人
EC149CW-2人结肠腺癌细胞人
EC150DLD-1人结直肠腺癌上皮细胞人1640贴壁
EC151Hce-8693人盲肠腺癌细胞(未分化)人
EC152HCT 116人结肠癌细胞人McCoy’s 5a贴壁
EC153HCT-15人结直肠腺癌细胞人
EC154HCT-8 [HRT-18]人回盲肠癌细胞人
EC155769-P人肾细胞腺癌细胞人
EC156786-O [786-0]人肾透明细胞腺癌细胞人1640贴壁
EC157ACHN人肾细胞腺癌细胞人
EC158Caki-1人肾透明细胞癌皮肤转移细胞人McCoy’s 5a贴壁
EC159OS-RC-2人肾癌细胞人
EC160SK-NEP-1人肾母细胞瘤细胞人McCoy’s 5a贴壁
EC161HCCC-9810人胆管细胞型肝癌细胞人1640贴壁
EC162Hep 3B2.1-7人肝癌细胞人
EC163Hep G2人肝癌细胞人IMDM贴壁
EC164HuH-6人肝母细胞瘤细胞人DMEM贴壁
EC165HuH-7人肝癌细胞人DMEM贴壁
EC166Li-7人肝癌细胞人
EC167PLC/PRF/5人肝癌亚力山大细胞人DMEM贴壁