大肠杆菌ScarabXpress T7lac菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 大肠杆菌ScarabXpress T7lac菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌ScarabXpress T7lac菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
大肠杆菌ScarabXpress T7lac菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC253MLTC-1小鼠睾丸间质细胞瘤细胞小鼠
EC254PC-12(低分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)大鼠
EC255PC-12(高分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)大鼠DMEM贴壁
EC256PC-12(未分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)大鼠
EC257RBL-2H3大鼠嗜碱性细胞白血病细胞大鼠
EC258UMR-106大鼠骨肉瘤细胞大鼠
EC259SHZ-88大鼠乳腺癌细胞大鼠
EC260RH-35大鼠肝癌细胞大鼠DMEM贴壁
EC261Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤细胞大鼠
EC262C6大鼠胶质瘤细胞大鼠DMEM贴壁
EC263CNE人鼻咽癌细胞人1640贴壁
EC264Colo-320人结肠腺癌细胞人1640或DMEM贴壁
EC265DU145人前列腺癌细胞人IMDM贴壁
EC266HEP 3B人肝癌细胞人EMEM贴壁
EC267PK-15猪肾细胞猪DMEM贴壁
EC268A2780人卵巢癌细胞人DMEM贴壁
EC269CA46Burkitts淋巴癌细胞系人1640悬浮
EC270Neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞小鼠EMEM贴壁
EC272BSC-1猴肾细胞猴MEM贴壁
EC273ST猪睾丸细胞系猪DMEM贴壁
EC274HEP-2人喉表皮样癌细胞人DMEM贴壁
EC275QSG7701人肝细胞人1640贴壁
EC276QGY7701人肝癌细胞人1640贴壁
EC277BGC-823人胃腺癌细胞(低分化)人1640贴壁