大肠杆菌Origami B(DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。
菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1. 大肠杆菌Origami B(DE3)菌种培养试剂的保存:
血清:-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。
培养基: 2oC – 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Origami B(DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红:
大肠杆菌Origami B(DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
EC1012GT39人胃癌细胞人1640贴壁
EC1013HECerEpiEC人正常子宫颈上皮细胞人
EC1014REC92A人前列腺干细胞人IMDM贴壁
EC1015SLK卡波西肉瘤细胞人DMEM贴壁
EC1016HMECB人黑色素瘤细胞人DMEM贴壁
EC1017EAEC-E2G8小鼠腹水瘤细胞小鼠IMDM半贴壁
EC1018IPEEC-1猪小肠上皮细胞猪1640贴壁
EC1020HDF-a***真皮成纤维细胞人
EC1021HPEC-Y5人胰腺细胞人DMEM贴壁
EC1022NEEC人食管癌细胞人DMEM贴壁
EC1023OVSAHO人卵巢癌细胞人DMEM贴壁
EC1024HMO6人小胶质细胞人DMEM贴壁
EC1025SNU119人卵巢癌细胞人1640贴壁
EC1026KM933EB病毒转化的人B淋巴细胞人1640悬浮
EC1027AN3ECA人子宫内膜腺癌(转移)细胞人EMEM贴壁
EC1028HA人星形胶质细胞人DMEM贴壁
EC1029NECI-H2591 人肺癌细胞人1640贴壁
EC1030LM8EC3H小鼠骨肉瘤细胞小鼠DMEM贴壁
EC1031MuM-2EC人眼脉络黑色素瘤细胞人DMEM贴壁
EC1032L2大鼠肺泡上皮细胞大鼠
EC10333AO人卵巢癌细胞人1640贴壁
EC1034hECMEECs人心脏微血管内皮细胞人
EC1035F98大鼠胶质瘤细胞大鼠DMEM贴壁
EC1036EECt1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞人EMEM贴壁
EC1037Hs832.TEC人卵巢良性肿瘤细胞人DMEM贴壁