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脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒 微量法

产品价格: ¥1400.00

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全国
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长期有效
最后更新:
1970-01-01 08:00:00
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46

产品详情

品牌名称:

产品内容:

提取液:液体100mL×1瓶,4保存。

试剂一:冰乙酸4保存。(自备)

试剂二:液体35 mL×1瓶, 4保存。

试剂三:甲***4保存。(自备)

标准品:粉剂×1脯氨酸10mg4保存。

 

产品说明:

脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。 

用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三***溶液反应生成红色;加甲***萃取后,在520nm测定吸光度。

实验需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、冰乙酸、甲***、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、样品测定的准备 

1、细胞、细菌或组织样品的制备  

细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min10000g常温离心10min,取上清,冷却后待测。

组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。

2、血清(浆)样品:取100μL血清(浆)加入0.9mL提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10min10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。

3、标准品的处理称取1mg,将标准品稀释为1510864210 μg/mL

 

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,甲***调零。

2、取0.5mL上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。

3、待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值。

4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。

 

三、Pro含量计算:

1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y为脯氨酸含量,μg/mLxOD)

2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算,首先根据标准曲线求得y值:

细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)= y÷细胞浓度(104 cell/mL)

Pro含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)

3、血清(浆)中脯氨酸含量,首先根据标准曲线求得y值:

Pro含量[μg/mL血清(浆)] = y÷0.1mL血清(浆)/mL

注意:提取液中含有蛋白沉淀剂,提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

 

 

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