第二代耐热逆转录酶

产品信息
产品名称
产品编号
规格
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价格（元）
HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐热逆转录酶
11110ES92
10000 U
-20℃
626.00
HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐热逆转录酶
11110ES93
5×10000 U
-20℃
2456.00
产品描述
HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase是在HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
产品组分
编号
组分
产品编号/规格
11110ES92 (10000 U)
11110ES93 (5×10000 U)
11110-A
5×HifairTM Ⅱ Buffer
250 μL
5×250 μL
11110-B
HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase (200 U/μL)
50 μL
5×50 μL
产品应用
全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
组分
使用量
RNase free ddH2O
to 13 μL
Oligo (dT)18 (50 μM)
or Random Primers (50 ng/μL)  
or Gene Specific Primers (2 μM)
1 μL
or 1 μL
or 1 μL
模板RNA
Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分
使用量
上一步的反应液
13 μL
5×HifairTM Ⅱ Buffer
4 μL
dNTP Mix (10 mM)
1 μL
HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase (200 U/μL)
1 μL
RNase inhibitor (40 U/μL)
1 μL
3. 逆转录程序设置
温度
时间
25℃
5 min
42℃
30-60 min
85℃
5 min
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃；
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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