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组织及血液酸性磷酸酶测定试剂盒 微量法

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长期有效
最后更新:
2019-06-11 16:44:11
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62

产品详情

品牌名称:

产品内容:

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体30mL×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。

标准品:液体1mL×1支,1μmol/mL酚标准液,4℃保存。

产品说明:

ACP在酸性条件下催化***酸单酯水解称无机***酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。

在酸性环境中,ACP催化***酸***二钠水解生成***酚,***酚与4-氨基安替和铁*化钾反应生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、 粗酶液提取

称取约0.1g组织,加提取液1mL充分研磨,410000rpm离心10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用提取液稀释。

二、 测定操作:

1.分光光度计预热30 min以上,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂置于37水浴中预热30 min以上。

试剂名称(μL

测定管

对照管

空白管

标准管

蒸馏水

-

-

20

-

1μmol/mL标准品

-

-

-

20

上清液

20

-

-

-

试剂一

40

40

40

40

试剂二

40

40

40

40

混匀后置于37℃水浴中保温15min

试剂三

120

120

120

120

上清液

-

20

-

-

混匀后于510 nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。

 

三、ACP活性计算: 

1.按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol酚。

ACP(U/mg pr)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V]÷(Cpr×V)÷T

            =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

2.按样本鲜重计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol酚。

ACP活力(U/g)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V] ÷(W÷V提取×V)÷T

             =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管W

3.血液中ACP活性计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚。

ACP活力(U)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V] ÷V÷T

            =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

    C标准品:0.5μmol/mLV样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.1mLV样总:1mLT:反应时间(min),15 minV提取:加入提取液体积,1mLW:样本鲜重,g

注意事项:

1试剂、试剂和试剂均需避光保存。

2试剂变蓝绿色后不能再使用。

3加入试剂后必须立即混匀,否则显色不完全。

4ACP不稳定,尤其在37℃pH大于7的条件下活力丧失快,因此酸性***酸酶样品一般需当天准备;血清样品中,每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠,使pH降至6.5以下,或5ml血清加入30%醋酸溶液23滴,置于4℃可保存1周。

 

 

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