过氧化物酶（POD）检测试剂盒
品牌：Solarbio | 货号：BC0090
- 英文名称 : Peroxidase (POD) Assay Kit
- 别名 : 过氧化物酶试剂盒 POD Kit 过氧化物酶（POD）试剂盒 过氧化物酶（POD）测试盒,过氧化物酶检测试剂盒
- 检测方法 : 可见分光光度法
产品介绍
测定意义：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD 催化H2O2 氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成：提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：液体×2 瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL 试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；试剂三：液体10 mL×1 瓶，4℃保存。
操作步骤： 一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。二、测定步骤和加样表：试剂名称（μL） 测定孔样本 15蒸馏水 270试剂一 520试剂二 130试剂三 135
测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。在1mL 玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm 下30s 时的吸光值A1 和1min30s 后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
注意：1. 若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min 以上，测定时加入15μL 样本和1055μL 混合液测定。2. 如果ΔA 小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA 大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。三、POD 活性计算：1、血清（浆）POD 活性单位定义：每mL 血清（浆）在每mL 反应体系中每分钟A470 变化0.01 为一个酶活力单位。计算公式：POD（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =7133×ΔA2、组织、细菌或细胞POD 活性(1) 按样本蛋白浓度计算单位定义：每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每分钟A470 变化0.01 为一个酶活力单位。POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr(2) 按样本鲜重计算单位定义：每g 组织在每mL 反应体系中每分钟A470 变化0.01 为一个酶活力单位。POD（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W(3) 按细菌或细胞密度计算单位定义：每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中每分钟A470 变化0.01 为一个酶活力单位。POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =14.27×ΔAV 反总：反应体系总体积，1.07mL； V 样：加入样本体积，0.015mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500 万。
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