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DIG-High Prime DNA LHieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module
快速末端修复/A尾添加模块
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module 快速末端修复/A尾添加模块 | 12608ES24 | 24T | -20℃ | 2066.00 |
12608ES96 | 96T | -20℃ | 6166.00 |
产品描述
Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块，具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容1 ng-1 μg片段化Input DNA，可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5端***酸化和3端加A尾反应，得到5末端含***酸基团且3末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化，即可使用Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）进行文库构建接头连接反应。
本产品已与Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff CanaceTM High-Fidelity PCR Master Mix（Cat#12620）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
组分名称 | 24 T | 96 T |
End Repair/dA-Tailing Buffer | 144 μL | 576 μL |
End Repair/dA-Tailing Enzyme | 96 μL | 384 μL |
质量控制
Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme
1. SDS-PAGE纯度：>95%。
2. 核酸内切酶活性：50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。
3. ***酸酶活性：在***酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对********酸，37°C孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对*****阴离子特征吸收峰。
4. 功能活性：在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5和3突出末端的片段化DNA，25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测，末端修复、加dA尾并***酸化的DNA比率>95%。
Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer
1. 16小时孵育检测：50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解；50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg T3 DNA，37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解。
2. 核酸内切酶活性：50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，RF II转化比<10%。
3. RNase活性：在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，条带无降解。
4. ***酸酶活性：在***酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM对********酸，37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对*****阴离子特征吸收峰。
测序验证
本品与Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff CanaceTM High-Fidelity PCR Master Mix（Cat#12620）共同用于DNA文库构建，已通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 将表1中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。
表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系
名称 | 体积（μL） |
Fragmented DNA | x |
End Repair/dA-Tailing Buffer | 6 |
End Repair/dA-Tailing Enzyme | 4 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表2所示反应程序，进行末端修复/dA尾添加反应。
表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序
温度 | 时间 |
热盖105°C | On |
20°C | 30 min |
65°C | 30 min |
4°C | Hold |
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。
相关产品
建库模块 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGSTM Smarter DNA Clean beads | 12600ES03 | 1 mL | 386.00 |
12600ES08 | 5 mL | 1386.00 | |
12600ES56 | 60 mL | 7586.00 | |
12600ES75 | 450 mL | 29886.00 | |
Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Superior Ampure XP alternative） | 12601ES03 | 1 mL | 296.00 |
12601ES08 | 5 mL | 986.00 | |
12601ES56 | 60 mL | 6286.00 | |
12601ES75 | 450 mL | 26186.00 | |
Hieff NGSTM End Repair Module | 12605ES20 | 20 T | 1466.00 |
Hieff NGSTM dA-Tailing Module | 12606ES20 | 20 T | 1766.00 |
Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module | 12607ES24 | 24 T | 3266.00 |
12607ES96 | 96 T | 10866.00 | |
Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent | 12609ES50T | 50 T | 1466.00 |
Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12611ES24 | 24 T | 1166.00 |
12611ES96 | 96 T | 4366.00 | |
Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12612ES24 | 24 T | 1166.00 |
12612ES96 | 96 T | 4366.00 | |
Hieff NGSTM Dual-Indexed Adapter Kit for Illumina® | 12614ES96 | 96 T | 6566.00 |
Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12615ES04 | 12×4 T | 1256.00 |
12615ES16 | 12×16 T | 4536.00 | |
Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12616ES04 | 12×4 T | 1256.00 |
12616ES16 | 12×16 T | 4536.00 | |
2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12620ES03 | 1ml | 526.00 |
12620ES08 | 5×1ml | 1426.00 |
版本号：HB170720
