Western Blot NC膜(0.22um)

一，***纤维素膜的优点，以及选择技巧：  

    ***纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，适用于各种显色方法，维素膜是通过疏水作用来和蛋白质相联，背景低，信噪比高。NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了；NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间。纯的硝纤膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途。混有含醋酸纤维（CM）的NC膜结合力会有所降低。 一般而言，NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加WB的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话最好选择 0.1um的膜。

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二，NC膜使用方法：

1. 转一张膜需准备6张7.0～8.3cm的滤纸和1张7.3～8.6cm的NC膜或PVDF膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。将切好的NC膜或PVDF膜置于水上浸2 h才可使用。（用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。这样由于毛细管作用可使整个膜浸湿。若膜沉入水里，膜与水之间形成一层空气膜，这样会阻止膜吸水。）在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。2. 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。（一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动。）在垫子上垫三层滤纸（可三张纸先叠在一起在垫于垫子上），一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。3.要先将玻璃板撬掉才可剥胶，撬的时候动作要轻，要在两个边上轻轻的反复撬。撬一会儿玻璃板便开始松动，直到撬去玻板。（撬时一定要小心，玻板很易裂。）除去小玻璃板后，将浓缩胶轻轻刮去（浓缩胶影响操作），要避免把分离胶刮破。小心剥下分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻棒擀去气泡。将膜盖于胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除去气泡。最后盖上另一个海绵垫，擀几下就可合起夹子。整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，接触后会发生短路。（转移液含甲醇，操作时要戴手套，实验室要开门以使空气流通。）4.将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰，或将转移槽埋于冰水混合物中来降温。一般用80V转移1h，或60V转移2 h，或40V转移3 h。5.转完后将膜用1×丽春红染液染5min（于脱色摇床上摇）。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白。将膜晾干备用。

三，相关转膜产品：

RPN303B-15*20    尼龙膜Hybond N+(0.45um)    Amersham    15*20cm    张RPN303B    尼龙膜Hybond N+(0.45um)    Amersham    30cm*3m    卷ISEQ00011    PVDF膜(0.22um)    Millipore    13.25*15    张ISEQ00010    PVDF膜(0.22um)    Millipore    26.5cm*3.75    卷IPVH00011    PVDF膜(0.45um)    Millipore    13.25*15    张IPVH00010    PVDF膜(0.45um)    Millipore    26.5cm*3.75    卷BSP0161    PVDF膜（0.2um）    PALL     26cm×3.3m    卷60336    Biodyne尼龙转印C膜负点6,6  0.45um    PALL    24cm*3m    卷60207    Biodyne尼龙转印B膜正电6,6  0.45um    PALL    30cm*3m    卷P-N66485    ***纤维素膜（NC膜0.22um）    PALL    15cm*20cm    张P-N66485    ***纤维素膜（NC膜0.22um）    PALL    30cm*3m    卷HATF00010    ***纤维素膜（0.45um）    millipore     15cm*20cm    个HATF00010    ***纤维素膜（0.45um）    millipore     30cm*3m    卷10401196    ***纤维素膜BA85  0.45um Whatman转印膜 NC膜    Whatman    30cm x 3m    卷

四，关于PVDF膜，NC膜，尼龙膜的区别：

五，关于PALL公司的NC膜的特点100 ％纯***纤维素应用：Colony/Plaque Lifts菌落/菌斑转移筛选 、核酸/蛋白转移、Protein Dot/Slot Blots蛋白斑点杂交试验优点：强的柔韧度和机械耐受力，无支持物构造，无去垢剂处理结合方式：疏水相互作用和静电相互作用检测方式：***性探针检测、直接染色、荧光检测、酶标抗体检测：化学发光和底物显色高蛋白/核酸结合能力：209 µg/cm2电转过程中低的蛋白穿孔现象膜的厚度：145 µm (5.7 mils)孔径大小：0.2um 0.45um