一,PVDF膜的作用原理以及优势:
聚偏二氟乙烯(PVDF)膜作为基质的转印膜由Millipore公司在1985年首先推出。 PVDF膜适用的检测方法也不少,化学发光、常规显 色、同位素和标准染色都一样OK,但不适合荧光。PVDF膜与***纤维素膜相比,PVDF膜在蛋白质截留能力,机械强度和化学相容性上都更优越的性能。市售***纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍!)。更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择;PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择,在使用PVDF膜前,一定要先用无水甲醇预处理,再在transfer buffer中平衡好才可以使用(PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合)。经过预处理的PVDF膜在转膜时,可以使用不含甲醇的transfer buffer。而使用NC膜时,有的需要用无水甲醇处理,有的则不必,直接用transfer buffer平衡好就可以了。PVDF膜同样分0.45um和0.2um的,后者孔径小,对小分子蛋白有较好的拦截吸附,背景可能会比前者稍高。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜,小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在使用时需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支持物材料。
二,关于Millipore公司的PVDF膜特点:
Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分为Immobilon-P(0.45um), -PSQ(0.2um), -FL(用于荧光显色) 。Immobilon-P膜孔径均一,具有极强的吸附能力,染色性能好、抗溶剂能力强和信噪比高,有助于提高检测灵敏度,而且开放 的孔结构容易接近被吸附的蛋白质,并有助于去除背景上没有吸附的探针,可以说是免疫印迹检测理想的印迹膜。Immobilon-PSQ转印膜是印迹小分子 蛋白质(<20KDa)的理想选择——优良的蛋白质吸附性能,渗漏少。内表面面积较大,可供蛋白质吸附从而提高蛋白质测序的得率。mmobilon-FL也是Millipore第一个 专门为荧光显色优化的转移膜。通过实验证明,这种膜在Kodak成像系统可以显示仅7ng的蛋白。
| Immobilon-P | Immobilon-PSQ | Immobilon-FL |
孔径大小 | 0.45um | 0.22um | 0.45um |
优点 | 适用于免疫印迹、斑点印迹和其它蛋白质印迹的最佳 PVDF 膜 | 小孔状结构生成 MW <20 kDa 的出众吸附蛋白质 | 针对荧光免疫检测应用进行了优化与所有常用的荧光探针(所有激发和发射波长)兼容 |
应用 | Western blotting、吸附分析、氨基酸分析、N 端蛋白质测序、Dot/Slot blotting、糖蛋白显色和脂多糖分析 | 低分子量 Western blotting、氨基酸分析和 N 端蛋白质测序 | Western blotting,Dot/Slot blotting |
蛋白质结合量µg/cm2 胰岛素 BSA 山羊 IgG |
160 215 294 |
262 340 448 |
155 205 300 |
可湿润性: | 疏水 | ||
主要吸附基质: | 静电与疏水 | ||
滤膜表面: | 光面 |
三,Millipore公司的PVDF膜相关产品货号规格:ISEQ00011 PVDF膜(0.22um) Millipore 13.25厘米*15厘米 张ISEQ00010 PVDF膜(0.22um) Millipore 26.5cm*3.75米 卷IPVH00011 PVDF膜(0.45um) Millipore 13.25厘米*15厘米 张IPVH00010 PVDF膜(0.45um) Millipore 26.5cm*3.75米 卷BSP0161 PVDF膜(0.2um) PALL 26cm×3.3m 卷
四,关于PVDF膜,NC膜,尼龙膜的区别:
| NC膜 | 尼龙膜 | PVDF膜 |
灵敏度和分辨率 | 高 | 高 | 高 |
背景 | 低 | 较高 | 低 |
结合能力 | 80-110 ug/cm2 | >400 ug/cm2 | 125-200 ug/cm2(适合于SDS存在下与蛋白质的结合) |
材料质地 | 干的NC膜易脆 | 软而结实 | 机械强度高 |
溶剂耐受性 | 无 | 无 | 有 |
操作程序 | 缓冲液润湿,避免气泡 | 缓冲液润湿 | 使用前100%甲醇润湿 |
染色方法 | 胶体金、丽春红、氨基黑、印度墨汁 | 不能用阴离子染料 | 胶体金、丽春红、氨基黑、印度墨汁、考马斯亮蓝 |
检测方式 | 化学显色、化学发光、荧光检测、***性检测 | 化学显色、化学发光、***性检测 | 化学显色、化学发光、荧光检测、***性检测 |
适用范围 | 0.45um 一般蛋白_x000B_0.2um一分子量小于20kD蛋白_x000B_0.1um一分子量小于7kD蛋白 | 低浓度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白和蛋白多糖(主要用在核酸检测中) | 糖蛋白检测和蛋白质测序 |
价格 | 价格较便宜 | 便宜 | 较贵 |
联系人:陈天添,微信号/手机号:13439225985,QQ:609810384