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DIG-High Prime DNA L2×UNICON® HotStart PCR Master Mix (No Dye)
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| 2×UNICON® HotStart PCR Master Mix (No Dye) | 10112ES03 | 1 mL | -20℃ | 96.00 |
| 2×UNICON® HotStart PCR Master Mix (No Dye) | 10112ES08 | 5×1 mL | -20℃ | 432.00 |
产品描述
2×UNICON® HotStart PCR Master Mix (No Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。UNICON® HotStart DNA Polymerase 的激活时间只需要 2-3 min，兼容现有的 PCR 程序。本产品防止了在样品准备阶段产生非特异扩增，可以有效地进行基因克隆和分型实验。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。预混液中不含染料。
产品应用
低拷贝基因扩增、基因型鉴定、菌落PCR
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA –Hind III，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
PCR反应体系（50 μL）
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| ddH2O | to 50 μL | - |
| 模板DNA | 适量 | - |
| Primer正向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
| Primer反向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
| 2×UNICON® HotStart PCR Master Mix（No Dye） | 25 μL | 1× |
【注】：针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50 μL反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
| 模板种类 | 模板使用量 |
| 基因组DNA | 50 ng-200 ng |
| 质粒DNA | 100 pg-20 ng |
| cDNA | 1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
PCR扩增程序
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 30 sec | 35 |
| 退火 | 50-60℃ | 30 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
【注】：1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为30 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30-60sec/kb。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
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