免疫印迹化学发光试剂(ECL Reagent)
用途:
本试剂是非***性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,其敏感性达1-10pg。用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持数小时的发光,便于反复曝光操作,免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。
原理:
辣根过氧化酶使试剂中的发光物(Luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离,并转移到固相膜上(如NC、PVDF)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后,Luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,此光可经X光片(***自显影片)感光记录下来。
操作注意:
1. 本试剂每个批号均独立优化,请不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性;
2. 加入一抗某膜不能再干燥;
3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要;
4. 使用前配置化学发光试剂,配置两足够覆盖膜片即可,弃去使用过的混合试剂;
5. 使用干净取样头取用每种试剂;
6. 第一张片子建议曝光30秒钟,观察结果后判断最佳曝光时间可从30秒至2小时不等;
7. 除了***自显影片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作;
8. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体,再次印迹使用,在此情况下,此试剂更为理想;
9. 因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物。
使用方法:
II. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合A液和B液,混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育1分钟,每平方厘米膜片至少使用0.125ml以覆盖全膜片。
III. 蛋白信号显现1. 用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。
2. 置膜片于二层保鲜膜之间,小心赶尽气泡。
3. 将膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。
4. 于暗室中压上X光片。
5. 曝光30秒,显影之。
6. 调节曝光时间,再次曝光显影。
IV、膜的重复使用:
配置
免疫印迹化学发光检测流程
电泳分离样品蛋白
↓
转移至固相膜
↓
封闭非特异结合位点
↓
与第一抗体温育反应
↓洗涤
与HRP-第二抗体交联物温育反应
↓洗涤
等量混合溶液A和溶液B↓
与膜片温育
↓
X光片曝光显影
订货信息:
¥480.00