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Pierce ECL Western blotting substrate免疫印迹化学发光试剂

产品价格: ¥480.00

最小起订量:暂无 可售数量:暂无

发货时限:
暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2020-09-28 02:00:01
浏览次数:
33758

产品详情

品牌名称:

免疫印迹化学发光试剂(ECL Reagent  

用途:

  本试剂是非***性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白,其敏感性达1-10pg。用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持数小时的发光,便于反复曝光操作,免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。

原理:

  辣根过氧化酶使试剂中的发光物(Luminol)氧化并发光,而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中,将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离,并转移到固相膜上(如NCPVDF)等,用于免疫学检测,经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后,Luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,此光可经X光片(***自显影片)感光记录下来。

操作注意:

1. 本试剂每个批号均独立优化,请不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性;

2. 加入一抗某膜不能再干燥;

3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要;

4. 使用前配置化学发光试剂,配置两足够覆盖膜片即可,弃去使用过的混合试剂;

5. 使用干净取样头取用每种试剂;

6. 第一张片子建议曝光30秒钟,观察结果后判断最佳曝光时间可从30秒至2小时不等;

7. 除了***自显影片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作;

8. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体,再次印迹使用,在此情况下,此试剂更为理想;

9. 因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物。

使用方法:

I. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要,在与HRP交联物温育后,膜片更需仔细洗涤,所有步骤均在室温下完成。

II. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合A液和B液,混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下振荡温育1分钟,每平方厘米膜片至少使用0.125ml以覆盖全膜片。

 

III. 蛋白信号显现1. 用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。

2. 置膜片于二层保鲜膜之间,小心赶尽气泡。

3. 将膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。

4. 于暗室中压上X光片。

5. 曝光30秒,显影之。

6. 调节曝光时间,再次曝光显影。

IV、膜的重复使用:

配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的***的溶液,胶片放入后,70?C振荡水浴30分钟。再用TBSTPBST缓冲液洗脱,最后用BSA(牛血清白蛋白)或牛奶封闭。

免疫印迹化学发光检测流程

电泳分离样品蛋白

转移至固相膜

封闭非特异结合位点

与第一抗体温育反应

洗涤

HRP-第二抗体交联物温育反应

洗涤

等量混合溶液A和溶液B

与膜片温育

X光片曝光显影

订货信息:

  480.00 

 

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