北京索莱宝科技有限公司  张净花  13426459985

产品介绍

货号：D2300

规格：50T/ 100T

保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2℃-8℃保存时间更长 。

试剂盒内容：                              D2300-50T                       D2300-100T

                      RNase A                    1ml                                    1ml×2

                     蛋白酶 K                     1ml                                     1ml×2

                     玻璃珠                          6g                                       11g

                     溶液 A                           10ml                                  20ml

                     溶液 B                           10ml                                  20ml

                     漂洗液                           15ml                                 15ml×2

                     洗脱液                           10ml                                  20ml

                     吸附柱                           50 个                                 100 个

                     收集管                           50 个                                 100 个

                     说明书                           1 份                                    1 份

产品简介：

真菌是具有真核和细胞壁的异养生物，种属很多，已报道的属达 1 万以上，种超过 10 万个。真菌通常又分为

三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌） 。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用

液氮研磨。经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA，可以直接用于

PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。

操作步骤：

使用 前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在

室温下离心。

1、样品的处理：

1）对于酵母菌，取 1-2ml 培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加

入 100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 5-10min。

2）霉菌(孢子也可相同处理)：取 50-100mg 菌丝，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入

20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 30min。

3）大型真菌（如蘑菇等） ：称取 50-100mg 样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复 3 次，使样品研成粉末（如

无液氮，可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器适当研磨） ，加 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃

珠，在高速振荡器上振荡，约 5min。

2、 加入 20ul 的蛋白酶 K （10mg/ml） ， 充分混匀， 55℃水浴消化 30min， 消化期间可颠倒离心管混匀数次。 12000rpm

离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。

3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混匀。如出现白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即会消失，不影响后续

实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子，请增加消化时间。

4、再加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，将溶液和絮状沉淀都加

入吸附柱中，放置 2 分钟。

5、12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附

柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则

漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

9、 将吸附柱放入一个干净的离心管中， 向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液， 室温放置 5min，

12000rpm 离心 1min。

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。

注意事项：

1. 由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶 K 处理，一般都可

以得到一定量的基因组 DNA，如电泳检测很弱，一般 PCR 都会有较好结果。

2. 若溶液 A 或溶液 B 中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。

3. 如果 DNA 提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取 DNA 成弥散短条带，可减少玻璃珠处理时间。

4. 洗脱缓冲液的体积*好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响，若需要

用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；

DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

5. DNA 浓度及纯度检测：得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回

收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD 260 处有显著吸收峰，

OD 260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA、40 μg/ml 单链 DNA。OD 260/ OD 280 比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不

使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

6. 在确保样品无误的情况下，如经过多次试验，都无法提出 DNA，请将部分样品寄至我公司，我们代为摸索优

化条件，以使您的实验能够正常进行下去。

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