产品信息
产品描述
DiI、DiO、DiD和DiR是一系列亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构,这是一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数,极性依赖性的荧光和很短的激发寿命。
DiD是DiI的衍生物,具有明显往红光迁移的激发和发射光谱,这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD可被633nm的氦-氖(He-Ne)激光所激发,呈红色荧光,在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,进入细胞后,染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞染色。
产品性质
运输和保存方法
冰袋(wet ice)运输。产品-20 oC干燥避光保存,有效期二年。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
使用方法
1. 染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1~5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。
2. 悬浮细胞染色
(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
(2)37 ℃孵育细胞 2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
(3)孵育结束,按1000~1500 rpm离心5min。
(4)倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
(5)重复(3),(4)步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)37 ℃孵育细胞 2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
(2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:
a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005
5. 流式细胞仪检测
经DiO,DiI,DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1,FL2,FL3或FL4通道检测。
表1 相关产品性质