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DIG-High Prime DNA LCalcium Phosphate Cell Transfection Kit
***酸钙法细胞转染试剂
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit ***酸钙法细胞转染试剂 | 40803ES70 | 200T | -20℃ | 625.00 |
产品描述
***酸钙法转染DNA是基于形成***酸钙-DNA沉淀的原理：***酸钙可促使细胞膜和DNA的结合，之后通过细胞内吞的作用将外源DNA转入目的细胞。该方法曾被用于多种细胞系的转染。翊圣生物的***酸钙法细胞转染试剂是在传统***酸钙法的基础上经过特别优化，不仅在转染效率有了较大提高，且降低了细胞毒性，特别适合于293或293T细胞的转染，对其他大多数常见细胞如Hela、CHO也具有较好的转染效果，不仅适用于细胞的瞬时转染，且适用于稳转株的筛选。
本品为无菌包装，可直接使用。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 40803ES70/规格 |
40803-A | CaCl2溶液 | 20ml |
40803-B | BBS溶液 | 20ml |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请?实验服并戴一次性手套操作。
2）高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，确保A260/A280＞1.8，且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。
3）在用***酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的CO2，CO2的最佳浓度为3%左右。
4）BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的CO2酸化。
5）转染时由于质粒、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。
使用说明
1. 对于贴壁细胞（以6孔板为例）
①转染前一天（20-24h），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时密度为70-90%。
②在转染前30-60min，吸去细胞培养液，加入新鲜的完全培养液（不含抗生素）2ml。
【注】：转染时最好使用新鲜配制的培养液；转染用的培养液可以在配制后分装冻存，使用时再解冻。
③取2-6µg待转染的质粒DNA（质粒总体积不宜超过20µl），加入到100µl CaCl2溶液中，充分混匀。
④把DNA- CaCl2溶液加入到100µl BBS溶液中，混匀，室温孵育10-20min。此时不会产生可见的沉淀。
【注】：该步骤顺序不能反，需把DNA- CaCl2溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl2溶液中。
⑤把DNA- CaCl2-BBS混合物均匀滴加到整个6孔板内。5%CO2，37℃培养细胞。
⑥根据实验要求和***酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16h后轻轻晃动培养板数次以充分悬浮一些***酸钙沉淀，吸去含***酸钙沉淀的培养液，加入2ml新鲜的完全培养液，继续培养。
⑦通常在转染约24h后就可以检测到转染基因的表达。
2. 对于悬浮细胞（以6孔板为例）
①离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。
②按照上面的步骤③和④制备DNA- CaCl2-BBS混合物。
③每106个细胞的沉淀，用100µl DNA- CaCl2-BBS混合物重新悬浮，室温放置20min。
⑤ 5% CO2，37℃培养细胞。
⑥ 根据实验要求和***酸钙对于不同细胞的毒性不同，在4-16 h后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2 ml完全培养液重新悬浮细胞，继续培养。
⑦ 通常在转染约24 h后就可以检测到转染基因的表达。
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