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磷酸钙法细胞转染试剂

产品价格: ¥625.00

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中国上海
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最后更新:
2020-07-04 02:00:02
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产品详情

品牌名称:

Calcium Phosphate Cell Transfection Kit

***酸钙法细胞转染试剂

产品信息

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价格(元)

Calcium Phosphate Cell Transfection Kit ***酸钙法细胞转染试剂

40803ES70

200T

-20

625.00

产品描述

***酸钙法转染DNA是基于形成***酸钙-DNA沉淀的原理:***酸钙可促使细胞膜和DNA的结合,之后通过细胞内吞的作用将外源DNA转入目的细胞。该方法曾被用于多种细胞系的转染。翊圣生物的***酸钙法细胞转染试剂是在传统***酸钙法的基础上经过特别优化,不仅在转染效率有了较大提高,且降低了细胞毒性,特别适合于293293T细胞的转染,对其他大多数常见细胞如HelaCHO也具有较好的转染效果,不仅适用于细胞的瞬时转染,且适用于稳转株的筛选。

本品为无菌包装,可直接使用。

产品组分

组分编号

组分名称

40803ES70/规格

40803-A

CaCl2溶液

20ml

40803-B

BBS溶液

20ml

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请?实验服并戴一次性手套操作。

2)高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件,确保A260/A2801.8,且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。

3)在用***酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%CO2CO2的最佳浓度为3%左右。

4BBS溶液的pH值直接关系到转染效率,尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中,以免被空气中的CO2酸化。

5)转染时由于质粒、细胞不同,最佳的质粒用量需自行摸索。

 使用说明

1.  对于贴壁细胞(以6孔板为例)

转染前一天(20-24h),胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染时密度为70-90%

在转染前30-60min,吸去细胞培养液,加入新鲜的完全培养液(不含抗生素)2ml

【注】:转染时最好使用新鲜配制的培养液;转染用的培养液可以在配制后分装冻存,使用时再解冻。

2-6µg待转染的质粒DNA(质粒总体积不宜超过20µl),加入到100µl CaCl2溶液中,充分混匀。

DNA- CaCl2溶液加入到100µl BBS溶液中,混匀,室温孵育10-20min。此时不会产生可见的沉淀。

【注】:该步骤顺序不能反,需把DNA- CaCl2溶液加入到BBS溶液中,不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl2溶液中。

DNA- CaCl2-BBS混合物均匀滴加到整个6孔板内。5%CO237℃培养细胞。

根据实验要求和***酸钙对于不同细胞的毒性不同,在4-16h后轻轻晃动培养板数次以充分悬浮一些***酸钙沉淀,吸去含***酸钙沉淀的培养液,加入2ml新鲜的完全培养液,继续培养。

通常在转染约24h后就可以检测到转染基因的表达。

2.  对于悬浮细胞(以6孔板为例)

离心收集悬浮细胞,用PBS洗涤一次。

按照上面的步骤制备DNA- CaCl2-BBS混合物。

106个细胞的沉淀,用100µl DNA- CaCl2-BBS混合物重新悬浮,室温放置20min在一个6孔板孔内加入2ml完全培养液(不含抗生素),然后加入来自上一步的细胞-DNA- CaCl2-BBS混合物,混匀。

 5% CO237℃培养细胞。

 根据实验要求和***酸钙对于不同细胞的毒性不同,在4-16 h后离心收集细胞,用PBS洗一次,然后用2 ml完全培养液重新悬浮细胞,继续培养。

 通常在转染约24 h后就可以检测到转染基因的表达。

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