干细胞温和消化酶
【干细胞温和消化酶 用途与描述】
专门用于干细胞的消化,包括脐带间充质干细胞,脂肪间充质干细胞,胚胎干细胞(ES)等。消化作用极其温和,对细胞的损害小。为目前干细胞临床研究与临床应用领域的最新产品。
本产品特别适用于大规模生产干细胞的企业。消除了导致干细胞培养失败的最大隐患——消化过度问题。本产品也特别适用于干细胞药物的研究与开发企业。无任何动物来源组分,成分明确,极大降低了干细胞药物申报的验证工作量与申报难度。
【干细胞温和消化酶 规格与保存】
产品名称 | 产品货号 | 规格与保存 |
干细胞温和消化酶 | NC1004 | 100mL/瓶,2-8℃保存,效期12个月 |
【干细胞温和消化酶 产品特点】
1. 产品容错性极好。即便消化时间长达15分钟,对干细胞的后续传代也几乎没有影响。减少了对操作人员技能的要求。
2. 即取即用,不需等待。4℃可稳定保存一年,不再需要-20℃保存。
3. 纯人工合成,无任何动物来源组分。无感染疯牛病毒(天然牛胰酶)或口蹄疫病毒(天然猪胰酶)的可能性。成分明确,无任何未知的后果。
【干细胞温和消化酶 产品性能】
新一代消化产品(温和消化酶)与传统消化产品(猪牛天然胰酶)全面对比表
项目类型 | 细分类别 | 传统产品 | 新一代产品 | |
消化性能 | 正常消化 (未消化过度) | 细胞活率 | 85% | 95%以上 |
消化后继续培养得到的细胞数 | 1.06x106 | 1.14x106 | ||
超时消化 (消化过度) | 细胞活率 | 60% | 95%以上 | |
消化后继续培养得到的细胞数 | 0.64x106 | 1.08x106 | ||
极端消化 (15分钟消化) | 细胞活率 | 0-10% | 90%以上 | |
消化后继续培养得到的细胞数 | 无法收货细胞 | 1.04x106 | ||
使用便利程度 | 消化后是否需要终止? | 需要 | 不需要 | |
是否需要-20℃保存? | 需要 | 不需要 | ||
是否可以即取即用? | 不可以 | 可以 | ||
使用综合成本 | 终止消化的成本 | 高。 需要使用血清、完全培养基或胰酶抑制剂。 | 极低。 不需终止消化。 加PSB稀释即可。 | |
细胞应用前病毒检测的成本 | 高。 需检测猪口蹄疫、牛 疯牛病等动物病毒。 | 0成本。 无动物源,所以无需检测 | ||
产品安全性 | 是否无动物来源组分? | 不是 | 是 | |
是否可以确知无动物病毒? | 不可以 | 可以 | ||
细胞药物申报难度 | 产品的残留影响的证明难度 | 极大。 各种杂质组分不明, 难以证明。 | 小。 成分明确,均为人工 合成的组分。 |
上述数据为接种脐带来源的MSC的P2代种子细胞,T25培养瓶,接种密度8000 cells/cm2,72小时后消化所得P3代细胞的对应数据。
正常消化(未消化过度)时,温和酶 确定好于 传统胰酶。
P2代MSC种子细胞,传代培养72小时后,分别用温和酶和传统胰酶消化,得到P3代MSC细胞,检测消化后的细胞活率。P3代MSC细胞继续培养72小时,分别用温和酶和传统胰酶消化,收获P4代MSC细胞,细胞计数。
细胞数量方面相差不大:温和酶比传统胰酶多出 7%。细胞活率方面相差较大:温和酶比传统胰酶高出10%。
对比类别 | 传统胰酶 | 温和消化酶 |
P3代MSC细胞活率 | 85% | 95% |
收到的P4代MSC细胞数量 | 1.06x106cells | 1.14x106cells |
复苏P2代MSC种子细胞,连续传代3次,分别用温和酶和传统胰酶消化。细胞数量方面:每一代温和酶均比传统胰酶多出 5%-10%。
4℃可稳定保存一年,不再需要-20℃保存。
干细胞温和消化酶在4℃环境下保存14个月,在超过有效期两个月后,酶活性仍保持在96%。
操作更便利,消化后不需终止消化,PBS稀释即可。
传统胰酶消化细胞后,需要额外添加血清,或完全培养基,或胰酶抑制剂,结合胰酶的消化位点,以达到终止消化的目的。温和消化酶由于其设计原理,在消化细胞后,不需要终止消化,只需要添加PBS,稀释消化酶,离心去除即可。极大便利了操作。
成分明确,无任何动物来源组分,更安全。更适合临床研究、临床应用或药物申报用途。
传统胰酶,取自牛或猪羊的胰脏,经后期纯化结晶而得。动物来源与提取工艺决定了传统胰酶难以避免感染动物病毒,如疯牛病毒,猪口蹄疫病毒等。因此难以应用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。温和消化酶,为全人工合成酶,消化位点清晰,经原核或真核系统表达,生产过程无任何动物来源组分的引入,所以安全性极高,尤其适用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
超时消化(消化过度)时,温和酶可多收细胞 68%。
分别超时2min消化MSC细胞,后传代培养72小时,收获细胞进行计数:温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 68%。且细胞镜下形态良好。而经传统胰酶消化的细胞,培养后镜下细胞形态杂乱。
传统胰酶延长消化2分钟,MSC的细胞照片 | 传统胰酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
温和酶延长消化2分钟,MSC的细胞照片 | 温和酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
极端消化(消化15分钟)时,温和酶基本不受影响。传统胰酶完全失败。
分别 15min消化MSC细胞,后传代培养72小时,收获细胞进行计数:温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 11倍。且细胞镜下形态良好。而经传统胰酶消化的细胞,培养后镜下细胞形态杂乱。
传统胰酶延长消化15分钟,MSC的细胞照片 | 传统胰酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
温和酶延长消化15分钟,MSC的细胞照片 | 温和酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
【干细胞温和消化酶 使用方法】
一、细胞消化前准备(以T25瓶为例)
1、观察贴壁细胞长满整个培养瓶视野80%以上,弃去细胞培养液。2、用5mL无钙镁的HBSS溶液或PBS清洗贴壁细胞,弃去清洗液。
二、细胞消化过程(以T25瓶为例)1、向T25瓶中加入1mL干细胞温和消化酶,置于室温环境中消化细胞。2、约2min后,细胞变圆,立即加入5mL PBS溶液进行稀释。3、将上述6mL含细胞液体转移至离心管中,置于离心机中离心,1000rpm,5min。4、去除离心管中的上清液。5、根据接下来的应用目的在离心管中加入干细胞培养基(细胞传代用途)或细胞冻存液(细胞冻存 用途)。