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高流速4B琼脂糖微球(Bio-Sep 4FF)

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全国
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长期有效
最后更新:
2021-05-31 01:30:04
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产品详情

品牌名称:

高流速4B琼脂糖微球是在4B琼脂糖微球的基础上经过两次交联形成的高交联基质,微球的化学稳定性及物理性能显著增强,刚性增加,流速更快,使产品处理时间大大缩短。可用于生物大分子的凝胶层析。

  1. 外观
  本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
  2. 理化指标
项    目
指    标
基   质
4% 交联琼脂糖
排阻极限
60000~20×106 (球蛋白)
形状
球形
粒径
50~160 μm
最高流速
250 cm/h*
耐压
0.1 MPa
耐热
120℃ pH7水中20min
pH适用范围
2~14 (短时间,在位清洗),2~12(长时间)
化学稳定性
以下溶液中40℃下稳定;2mol/L NaOH;70%EtOH;30%异丙醇;30%乙***;1%SDS;6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素
  *检测条件: 层析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl
  3. 包装
  产品以聚胺酯瓶密封包装,外贴标签,注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。
  4. 贮存
  产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。
  用过的柱子贮存在4℃(20% 乙醇)。
  5. 注意事项
  本品应避免与氧化剂接触,避免长时间暴露在空气中
  6.运输
  运输中应避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。
  7.保质期
  暂定5年。
  8.应用
  本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗,适用于工业规模生产,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
  下面简要介绍介质的使用过程。
  8.1 装柱
  凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙***-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。
  ⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
  ⑵选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。匀浆作脱气处理。
  ⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
  ⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
  ⑸打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子,到柱床稳定。
  ⑹最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。
  8.2平衡
  让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
  8.3上样
  ⑴样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。
  ⑵介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。
  ⑶上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。
  8.4洗脱
  用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
  8.5再生
  一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
  8.6注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。
  若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
  8.6 在位清洗
  ⑴ 对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。
  ⑵ 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH 去除。
  ⑶ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
  清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。
  8.7注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。
  8.8 去热源
  用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除:
  ⑴ 2倍柱体积的70%乙醇
  ⑵ 2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5
  ⑶ 1倍柱体积4M尿素
  ⑷ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl
  以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制
  8.9 消毒
  用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
  8.10灭菌
  置介质于高压灭菌锅中120℃下20分钟。

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