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大鼠血清（大鼠血浆）
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培养箱除菌剂
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Phospho-Threonine An
Phospho-Tyrosine Ant
Phospho-Tyrosine Ant
Rabbit polyclonal to| 货号： | F4002 |
| CAS号： | Phos-tag是一种新型的磷酸盐结合标签和功能分子，在中性pH（生理pH）条件下可以特异性结合磷酸离子，最早是由日本广岛大学的小池教授课题组于2002年开发。 |
| 供应商： | 恒斐生物 |
| 数量： | 大量 |
| 英文名： | Phos-tag Acrylamide |
| 保质期： | 5个月 |
| 保存条件： | 2-10℃ |
| 规格： | 5mg、10mg、50mg |
Phos-tag Acrylamide 用于磷酸化和非磷酸化蛋白的分离
Phos-tag是一种新型的磷酸盐结合标签和功能分子，在中性pH（生理pH）条件下可以特异性结合磷酸离子，最早是由日本广岛大学的小池教授课题组于2002年开发。Phos-tag是一种双环金属络合物（1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II) complex），是一种选择性的磷酸结合标签，在中性pH的水溶液中，其对苯基磷酸酯二价阴离子（PH-OPO32-）的Kd值为25 nM* (*：在Zn2+的情况下)。
Phos-tag Acrylamide提供了一种特异性的电泳过程（锰 (II)-Phos-tag SDS-PAGE），可同时对磷酸化蛋白及其对应的非磷酸化形式进行分析。
1. 可识别Ser / Thr / Tyr 的所有磷酸化形式。
2. 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续操作。
3. 可用总抗体而非抗磷酸化蛋白的抗体即可同时检测磷酸化和非磷酸化的蛋白。
4. 在制备SDS-PAGE凝胶时只需在丙烯酰胺溶液中简单加入Phos-tag Acrylamide和MnCl2溶液*即可。
（*：由于1个Phos-tag可结合2个锰离子（Mn2+），在凝胶中加入5.0 mM Phos-tag Acrylamide水溶液和10 mM MnCl2溶液。）
(1) 染色
• 适于激酶实验。
• 与常规SDS-PAGE几乎相同的机制。
(2) Western Blotting
• 不需要准备针对磷酸化蛋白的抗体。
• 可用于内源性蛋白的磷酸化分析。
• 不需要放射性同位素标记。
1. 酪氨酸激酶Abl磷酸化的时间进程
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磷酸化的酪氨酸经GST结合蛋白酪氨酸激酶Abl 及其底物肽（Abltide）制备，并分别用常规SDS-PAGE和Phos-tag. SDS-PAGE进行分离。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白用常规SDS-PAGE是无法分开的（上图：缺乏Phos-tag）。
而Phos-tag SDS-PAGE (下图：100 μM Phos-tag Acrylamide)可以确定在聚丙烯酰胺凝胶中磷酸化蛋白及其非磷酸化蛋白的时程比率。
参考文献：
1. E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike. Phosphate-binding tag: A new tool to visualize phosphorylated proteins, Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006).
2. S. Yamada, H. Nakamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro. Separation of a phosphorylated histidine protein using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry, 360, 160-162 (2007).
3. E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike. A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry, 378, 102-104 (2008).
4. E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike. Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose, Proteomics, 9, 4098- 4101 (2009).
5. E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike. Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE, Nature Protocols, 4, 1513-1521 (2009).
