点击图片查看原图
基因过表达小鼠
动物活体成像实验
C57BL/6小鼠骨髓间质
C57BL/6小鼠神经干细
C57BL/6小鼠胚胎干细
C57BL/6小鼠脂肪间质
1.5 ml 高转速高透明
2ml离心管 labcon超速
0.2ml PCR管，Labcon 
2ml离心管 labcon离心一、技术原理 TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease) 技术是基于对DNA识别域 (TALEN 结合臂) 和人工改造的核酸内切酶的切割域(FokⅠ)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TALEN的DNA识别域是由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成，每个模块由34个氨基酸组成，其中第12和13位的氨基酸种类为可变的（RVDs），且决定了该模块识别靶向位点的特异性。通过DNA识别域结合到靶位点上，以及FokI的切割域形成二聚体后，可特异性对目标基因DNA实现切断，在非同源末端连接修复过程中，DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。 该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类模式动物的研究领域。 二、技术特点： 1、可以应用于大小鼠；无动物品系限制，永久失活； 2、成功率可达90%以上； 3、实验周期短、价格低 。 三、制备流程及服务周期 设计、构建Talen质粒（2周）→TALEN质粒体外转录成mRAN（1周）→mRAN原核显微注射(F0代鼠生产) （4周）→F1代鼠生产（12周）四、服务承诺 赛业生物科技承诺提供4只F1代大鼠。五、TALEN 技术流程图 TALEN由四部分组成：N端序列，RVD，C端序列，FokI。利用Type II限制性内切酶可以将RVDs模块分别生成不同的粘性末端，同时又不留有酶切位点， 通过一系列的相应酶切连接反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。 TALEN系统利用FokI的内切酶活性打断目标基因。FokI形成二聚体发挥活性，在TALEN结合臂的引导下，发挥特异性内切酶活性，在两个靶位点之间剪切DNA，形成DSB（Double-Strand Breaks）,诱发DNA损伤修复机制。细胞通过NHEJ（Non- homologous End Joining）修复DNA，在此修饰过程中导致删除或插入了一定数目（非3的倍数）的碱基，造成移码，形成对目标基因特异性KO的突变体。 
六、Cygen 利用TALEN技术成功构建 IgM KO Rat 案例：
SD Rat IgM Knockout(TALEN)
T TCCTGCCCAGCTCCAT ttccttctcctggaact ACCAGAACAACACTGA ATAL1 RVDs：NG HD HD NG NN HD HD HD NI NN HD NG HD HD NI NG TAL2 RVDs：NG HD NI NN NG NN NG NG NN NG NG HD NG NN NN NG
结果：Sequencing confirmation of disruption of the Rat IgM by TALEN
突变型1、突变型2、野生型结果说明： 突变型1: 缺失12 bp；突变型2: 缺失5 bp。
