货号: | KIHC-1 |
供应商: | 上海恒斐生物科技有限公司 |
数量: | 10 |
保质期: | 一年 |
规格: | 1ml/5ml |
该免疫组化试剂盒利用最新的聚合技术将多个过氧化物酶(HRP)分子及抗鼠及抗兔免疫球蛋白
(IgG)偶联到多聚物上,形成的聚合物(二抗)具有放大信号增加敏感度、减少非特异性背景特点。
与兔或者鼠一抗进行搭配使用,结合后再与 DAB 反应,可得棕色显色。该反应体系不含生物素和链霉
亲和素,不受内源性生物素影响,背景极低;只需要二步反应,即可完成实验过程。
产品应用
DAB 工作液配制:
实验前,将 DAB 原液与 DAB 稀释液按照 1:50 比例配制本次实验所需要的用量,混匀后避光备用。
实验步骤:(以石蜡切片染色程序为例)
1) 将石蜡切片脱蜡至水:先将切片置于二甲苯中 10 分钟,2 次。然后依次在 100%,95%,80%和 60%
乙醇,每级放置 5 分钟。再用蒸馏水浸洗 3 次,每次 3 分钟。
2) 抗原修复:根据抗原抗体情况,必要时对切片进行抗原热修复:加入柠檬酸缓冲液后,将切片放置
微波炉,中火修复 2 次,每次 5 分钟。结束后在柠檬酸缓冲液自然冷却,35 分钟。然后用 TBS 冲
洗 3 次,每次 1 分钟。
3) 加入 3%H2O2,室温 10 分钟以灭活内源性酶。TBS 冲洗 3 次,每次 1 分钟。
4) 封闭:用 TBS 制备 5%封闭血清,室温 1 小时。注意血清来源种属要与二抗来源种属一致。(如无
合适血清,可用 PBS(或 TBS)制备 5%BSA)
5) 孵育一抗:滴加适当稀释的一抗(兔或鼠一抗),37℃1~2 小时或 4℃过夜。TBS 冲洗 3 次,每次
1 分钟(一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度
不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6) 孵育二抗:滴加 50-100μL 抗兔/鼠 HRP 标记聚合物,37℃孵育 30 分钟,TBS 冲洗 3 次,每次 1 分
钟。
7) DAB 显色: 滴加预制好的显色剂 DAB 工作液 50-100 微升,室温孵育 5-10 分钟, 或者镜下控制反
应时间。蒸馏水洗涤。
8) 苏木素复染 2-3 分钟,然后蒸馏水冲洗
9) 各级酒精(60-100%)脱水,每级 5 分钟。取出后置于二甲苯 10 分钟,2 次。用封片胶封片、显微
镜观察。
备注:如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复,方法与石蜡切片
2-8 步骤相同。
产品保存:
该试剂盒应在 2-8 度保存,并在有效期(一年)内使用,切忌反复冻融。
注意事项:
1.在抗原修复及后续免疫组化染色过程中都需避免组织切片干燥,保持湿润;
2.良好染色效果的获得很大程度上取决于标本制备和正确的实验方法,建议每批实验设置阴阳性对
照;
3.本说明书所提供的操作方法仅供参考,如遇特殊情况需要根据实际情况进行调整。