货号: | PT005 |
保存条件: | 室温 |
供应商: | 上海博谷生物科技有限公司 |
数量: | 1 |
英文名: | Nissl Staining Solution |
保质期: | 1 |
规格: | 100ml |
- 博谷生产的尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液,用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。
- Nissl染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl的名字命名的。
- Nissl染色液染色后呈蓝紫色,常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。Nissl小体大而数量多,说明神经细胞合成蛋白质的功能较强;相反在神经细胞受到损伤时,Nissl小体的数量会减少甚至消失。
- 本Nissl染色液染色的有效成分是Cresyl violet。Cresyl violet可以和RNA或DNA结合,可以染色粗面型内质网上的核糖体,也可以染色细胞核。染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。
- 一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
- 室温避光保存,至少一年有效。
使用方法:
1. 样品处理
a) 对于石蜡切片:
二甲苯中脱蜡5-10分钟。
换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟;90%乙醇2分钟;70%乙醇2分钟;蒸馏水2分钟。
b) 对于冰冻切片:蒸馏水2分钟。
c) 对于培养细胞:
用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
2. 尼氏(Nissl)染色
对于上述处理好的样品:
尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间,染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀)。蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。95%乙醇约5秒。此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
注:如果用于免疫组化等染色后的复染,可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。
3. 脱水、透明、封片或进行其它染色
a) 脱水、透明、封片:
95%乙醇脱水2分钟。换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。二甲苯透明5分钟。
换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察,细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。
b) 进行其它染色:
如果进行免疫荧光染色,或进行Hoechst等荧光染料的染色,在Nissl染色液染色后:
70%乙醇洗涤2次,每次2分钟。PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。
注意事项:
- Nissl染色液的染色能力很强,并且染色后很难去除,请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。
- 需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脱水、透明和封片处理,还需自备二甲苯,中性树胶或其它封片剂。如果样品是石蜡切片,需自备90%乙醇,无水乙醇以及二甲苯。
- 样品数量较多时,可以使用博谷生产的染色架和染色缸,便于操作。第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。