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人脂肪间充质干细胞成骨分化试剂盒

产品价格: ¥1190.00

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发货时限:
暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-04-16 01:30:01
浏览次数:
35

产品详情

品牌名称:
麒盟生物
货号: CHEM-200004
供应商: 上海麒盟生物科技有限公司
数量: 1
保质期: 12月
规格: kit
产品介绍
间充质干细胞(MSC)具有多向分化的潜能,体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会(ISCT)确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目,目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。
为方便科研用户鉴定MSC的分化能力,麒盟干细胞研究中心精心优化MSC成脂诱导分化试剂盒,其中包括成脂诱导培养体系和鉴定所需要的染色液,让用户可以稳定有效地鉴定MSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法,用于鉴定MSC是否具有成骨分化能力。除此以外,试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测,如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意脂肪颗粒导致的自发荧光或遮光问题。
本产品仅适用于科研。
产品信息
产品名称:人脂肪间充质干细胞成骨分化试剂盒
货号:CHEM-200004
批号:见包装
试剂清单:
序号 名称 数量 货号
A 人脂肪间充质干细胞成骨分化培养基 2 CHEM-200004-A
B 人脂肪间充质干细胞成骨分化血清 2 CHEM-200004-B
C 双抗 2 CHEM-200004-C
D 抗坏血酸 2 CHEM-200004-D
E β-甘油磷酸钠 2 CHEM-200004-E
F 地塞米松 2 CHEM-200004-F
G 茜素红染液 1 CHEM-200004-G
H 明胶溶液 2 CHEM-100001-10ML
 
存储与有效期:
A、G、H液于2-8 ℃避光保存,B-F液于-20 ℃避光保存。所有组分均需要避免反复冻融及复温,各组分在所需要的温度下有效期为1年,配制完成的完全培养基于2-8 ℃保存,有效期为2个月。
产品介绍
人脂肪间充质干细胞(hAMSC)具有多向分化的潜能,体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会(ISCT)确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目,目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。
为方便科研用户鉴定MSC的分化能力,麒盟干细胞研究中心精心优化hAMSC成骨诱导分化试剂盒,其中包括成骨诱导培养体系和鉴定所需要的染色液,让用户可以稳定有效地鉴定hAMSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法,用于鉴定hAMSC是否具有成骨分化能力。除此以外,试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测,如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意钙沉积导致的自发荧光问题。
本产品仅适用于科研。
操作方法
实验准备
²  试剂配制:
室温融化C、D、E、F溶液,将融化的溶液加入A液中,然后将B液加入A液中,充分混匀。
注意:CDE液先于F20 分钟溶解、溶解后旋涡混匀、1000 g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A液后,吸取A液洗涤溶液瓶两次,将洗涤液加入A液中。所有液体混合成诱导完全培养基后必须充分混匀,2-8 保存。整个过程需无菌操作,适当以75%酒精擦拭表面。
²  培养皿处理:
加适量明胶溶液到培养器皿中,轻轻摇动使其覆盖整个培养器皿底面,室温静置30-60分钟。弃去明胶溶液,室温晾干。
注意:本试剂盒建议使用六孔板操作,每孔加明胶溶液1 ml,使用其他培养器皿时需考虑实验结果的稳定性。整个过程需在超净工作台中操作,避免污染。
²  自备试剂:
l  消化液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA)
l  磷酸盐缓冲液(DPBS)
l  hAMSC完全培养基
l  4%中性多聚甲醛溶液
注意:hAMSC完全培养基不含血清,则需要准备胰酶抑制剂。hAMSC消化极易过度,建议稀释消化液一倍,且严格控制消化时间。
操作步骤
1.      准备所需诱导分化的hAMSC,当细胞融合达85%左右时,用消化液消化细胞,并用hAMSC完全培养基重悬。
2.      按照4×104 cells/cm2的密度将细胞接种于已明胶处理的六孔板中,每孔hAMSC完全培养基2 ml,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:细胞密度为该试剂盒的标准密度,若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳定性。
3.      当细胞融合达60%时,弃去培养上清,每孔添加hAMSC成骨诱导分化完全培养基2 ml/well,37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意:成骨诱导后细胞极易脱壁,换液时完全培养基必须经37 复温。添加培养基时动作要轻柔,避免吹起细胞。
4.      每3天更换新鲜的hAMSC成骨诱导分化完全培养基,持续培养2-4周。
注意:一般10天左右出现钙沉淀,培养液会较原先浑浊。根据需要可以选择培养终止时间,但不易超过4周。
5.      诱导培养结束时,弃去培养上清,DPBS洗细胞两次,4%中性多聚甲醛溶液2 ml/well室温固定细胞20分钟。
注意:培养结束时或中途可以选择其他检测方法,如基因表达检测等,若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。
6.      弃去固定液,DPBS洗2次,加入茜素红染液1 ml/well染色15分钟。
注意:该步骤适用于鉴定成骨能力,若出现钙沉积则会呈现红色着色。若需要得到美观的图片,则染色时间需自己掌握。
7.      弃去茜素红染液,DPBS洗3次。
8.      显微镜下观察并拍照。
9.      结果判定:按照程序操作完毕,低倍镜下观察可见红色着色点,此处为钙结节,说明实验所用的hAMSC具有成骨能力。否则,所使用的hAMSC无成骨能力。
结果展示
  
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温馨提示:不可用于临床治疗。

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