货号: | PAC000001 |
保存条件: | 2-8度 |
技术指标:每毫升rProtein G结合30-55mg人血清IgG,22-45mg兔IgG /ml填料,
- 产品简介
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白A,最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。
- 产品技术指标
rec-Protein A分子量:34.85 KDa
每分子rec-Protein A可结合IgG位点数:4个
rec-Protein A可结合白蛋白位点数:无
线性流速:300-500 cm/h
耐压指数:≤0.3 MPa(填料)
- 注意事项
- 产品保存
- rec-Protein A预装柱纯化IgG抗体步骤
1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;
2. 将rec-Protein A-Sepharose装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);
4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;
5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。
6. 用5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0)进行再生处理,再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。最后于层析柱中加入10倍柱体积, 20% Ethanol,4~8 ℃冰箱保存处理。
同类产品纯化效果比较
美国某知名品牌的rProtein A Sepharose 4FF 亲和层析柱对人血清进行纯化,其对人IgG的最大结合量约为34 mg/mL Medium。
表1 rProtein A与不同来源Ig的反应活性情况
IgG类型 | Protein A | IgG类型 | Protein A | IgG类型 | Protein A |
人 IgG1 | ++++ | 小鼠 IgG2b | +++ | 仓鼠 Ig | + |
人 IgG2 | ++++ | 小鼠 IgG3 | ++ | 豚鼠 Ig | ++++ |
人IgG3 | - | 小鼠 IgM | +/- | 牛 Ig | ++ |
人IgG4 | ++++ | 大鼠 IgG1 | - | 马 | ++ |
人IgA | ++ | 大鼠 IgG2a | - | 奶牛 | ++ |
人n IgD | ++ | 大鼠 IgG2b | - | 猪 | +++ |
人IgE | ++ | 大鼠 IgG2c | + | 绵羊 | +/- |
人 IgM | ++ | 大鼠 IgM | +/- | 山羊 | - |
小鼠 IgG1 | + | 兔 Ig | ++++ | ||
小鼠 IgG2a | ++++ | 鸡 Ig | - |
特性 | rProtein A | 特性 | rProtein A |
柱体积规格 | 1mL,5mL | 填料稳定性 | >20纯化周期 |
基质组成 | 4%高交联度琼脂糖 | pH稳定性 | pH 2~11 |
基质平均粒径 | 90μm | 推荐工作pH范围 | pH 3~10 |
功能基团 | rProtein A:34.85kDa; IgG结合位点:4 | 推荐在位清洗pH范围 | pH 2~11 |
配基密度 | ≈3mg rProtein A/mL 基质 | 工作温度 | 4~40℃ |
结合能力 | 30-55mg人IgG/mL填料 | 运输条件 | 20%乙醇浸泡,室温运输 |
推荐流速 | 30~150cm/mL | 贮藏条件 | 20%乙醇条件下, 4~8℃保存 |
重组蛋白A预装柱
目录号 | 规格(ml) | 备注说明 |
PAC000001 | 1 | 手动 |
PAC000005 | 5 | 手动 |
PAC100001 | 1 | 自动 |
PAC100005 | 5 | 自动 |
重组蛋白A填料
目录号 | 规格(ml) |
PAC001005 | 5 |
PAC001025 | 25 |
PAC001100 | 100 |