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重组蛋白A预装柱/填料

产品价格: ¥900.00

最小起订量:暂无 可售数量:999盒

发货时限:
暂无
所在地区:
中国广东广州市
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-07-01 01:30:03
浏览次数:
52
企业信息

产品详情

品牌名称:
JET
货号: PAC000001
保存条件: 2-8度
重组蛋白A预装柱/填料
技术指标:每毫升rProtein G结合30-55mg人血清IgG22-45mg兔IgG /ml填料
         4-12mg鼠血清IgG/ml填料4-13mg鼠腹水IgG/ml填料
  • 产品简介
蛋白A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。使用的rec-Protein A是通过基因工程-重组蛋白的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点,特异性更好。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白A,最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。
  • 产品技术指标
    rec-Protein A/Sepharose 比值:2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose
    rec-Protein A分子量:34.85 KDa
    每分子rec-Protein A可结合IgG位点数:4个
    rec-Protein A可结合白蛋白位点数:无
    线性流速:300-500 cm/h
    耐压指数:≤0.3 MPa(填料)
  • 注意事项
请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时,将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。
  • 产品保存
产品储存于2-8℃,保质期两年。
 
  • rec-Protein A预装柱纯化IgG抗体步骤
以下实验方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rec-Protein A的结合能力不同,具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;
2. 将rec-Protein A-Sepharose装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);
4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;
5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。
6. 用5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0)进行再生处理,再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。最后于层析柱中加入10倍柱体积, 20% Ethanol,4~8 ℃冰箱保存处理。

同类产品纯化效果比较
美国某知名品牌的rProtein A Sepharose 4FF 亲和层析柱对人血清进行纯化,其对人IgG的最大结合量约为34 mg/mL Medium。 
表1 rProtein A与不同来源Ig的反应活性情况
IgG类型 Protein A IgG类型 Protein A IgG类型 Protein A
人 IgG1 ++++ 小鼠 IgG2b +++ 仓鼠 Ig +
人 IgG2 ++++ 小鼠 IgG3 ++ 豚鼠 Ig ++++
人IgG3 - 小鼠 IgM +/- 牛 Ig ++
人IgG4 ++++ 大鼠 IgG1 - ++
人IgA ++ 大鼠 IgG2a - 奶牛 ++
人n IgD ++ 大鼠 IgG2b - +++
人IgE ++ 大鼠 IgG2c + 绵羊 +/-
人 IgM ++ 大鼠 IgM +/- 山羊 -
小鼠 IgG1 + 兔 Ig ++++    
小鼠 IgG2a ++++ 鸡 Ig -    
表2 rProtein A预装柱系列产品参数
特性 rProtein A 特性 rProtein A
柱体积规格 1mL,5mL 填料稳定性 >20纯化周期
基质组成 4%高交联度琼脂糖 pH稳定性 pH 2~11
基质平均粒径 90μm 推荐工作pH范围 pH 3~10
功能基团 rProtein A:34.85kDa;
IgG结合位点:4
推荐在位清洗pH范围 pH 2~11
配基密度 ≈3mg rProtein A/mL 基质 工作温度 4~40℃
结合能力 30-55mg人IgG/mL填料 运输条件 20%乙醇浸泡,室温运输
推荐流速 30~150cm/mL 贮藏条件 20%乙醇条件下,
4~8℃保存
 
重组蛋白A预装柱
目录号 规格(ml) 备注说明
PAC000001 1 手动
PAC000005 5 手动
PAC100001 1 自动
PAC100005 5 自动
 
重组蛋白A填料
目录号 规格(ml)
PAC001005 5
PAC001025 25
PAC001100 100
温馨提示:不可用于临床治疗。

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