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人源肿瘤成瘤实验服务| 提供商： | 武汉云克隆诊断试剂研究所 |
| 服务名称： | 佐剂诱导的大鼠关节炎模型 |
| 规格： | 只 |
佐剂诱导的小鼠关节炎模型
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一个累及周围关节为主的多系统性、炎症性的自身免疫疾病，其特征性症状为对称性、周围性多个关节慢性炎症病变，其发病机制十分复杂，迄今尚未完全阐明。
佐剂性关节炎模型是Freund于20世纪50年代创立的，又称弗氏佐剂关节炎，弗氏佐剂分为完全佐剂(CFA)和不完全佐剂(IFA)。其机制是结核杆菌致关节炎抗原为65 kD热休克蛋白(HSP)，RA病人软骨内具有与65kD HSP相似的蛋白多糖桥联蛋白抗原成分，FCA注入激活T细胞，激活T细胞参与RA发病机制。此模型存在明显的细胞免疫异常，为一种典型的免疫性炎症模型，并且制作方法简单，可广泛应用于多种动物，便于研究者选择应用。研究表明，在 RA 发病过程中，促炎细胞因子(IL-1，TNF-α，IFN-γ，IL-2 等) 和抗炎细胞因子 (IL-4，IL-10，TGF-β等) 的不平衡占有重要地位，其中 IL-1 和 TNF-α 参与多种病理学过程，在发病机制中尤为重要。
1.实验动物
SPF级Babl/C小鼠，健康，雄性，体重为18g-22g。
2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.主要试剂
完全弗氏佐剂(CFA)（Sigma公司）
4.建模方法
抓取小鼠，于右后足皮内注射 0.1 mL CFA 致炎，从而建立小鼠佐剂性关节炎模型；对照组于右后足趾皮下注射0.01moL/L 冰醋酸 0. 1mL，以排除 CFA 中溶剂的致敏效应。
5.模型的评价
5.1 体质重测定：分别于0d、7d、14d、21d、28d记录小鼠的体重，比较模型组小鼠体重和对照组小鼠的体重变化；
5.2 免疫评价：
称量小鼠体重，处死小鼠，取出脾和胸腺，生理盐水漂洗后用纱布吸干表面水分，分别于电子天平上称质量(湿质量)，并计算脏器指数。
脏器指数 = 器官湿质量(mg) /小鼠体重(g)
5.3 足跖肿胀值（mm）测定：
足趾肿胀度是佐剂性关节炎测量的一个重要指标。0d时在小鼠足跖同一地方做标记，用电子游标卡尺以标记为准，测定小鼠足跖厚度，以后每隔7d(7、 14、21d和28d时)再分别测量，进行自身左右侧足跖对照和组别间对照。
5.4 关节炎指数(arthritisindex index，AI)评价：
采用关节炎指数积分评价其关节炎症程度。除了诱导部位右后足以外，根据其余3只未注射的肢体病变程度和趾间是否发炎对每一足爪分别进行打分，以0～4分记录，累积得分即为每只小鼠的关节炎指数。
0分：无红斑和肿胀的证据；
1分：红斑和轻度肿胀局限于足中段或踝关节；
2分：红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至足中段；
3分：红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至关节；
4分：红斑和重度肿胀包括了踝、足和趾；
5.5 组织病理学评价：
处死小鼠，留取剔除软组织的后肢踝关节，固定、脱钙、包埋、石蜡切片后行HE染色作组织学观察。正常小鼠踝关节结构正常，无炎性细胞浸润，滑膜细胞排列整齐，软骨表面光滑，关节腔内未见渗出液；模型组小鼠关节破坏明显，周围大量中性粒细胞浸润，滑膜增生肥厚，纤维组织增生，软骨及骨骼损伤。
5.6 小鼠血清中 炎症因子含量测定：
小鼠3%戊BA比妥钠麻醉后，摘取眼球取血，静止30min，4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。使用ELISA试剂盒检测TNFα、IL-1β等细胞因子。
5.7 统计学处理
应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（`x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著性差异。
对照组
模型组
图1 足爪大体图（模型组足爪可见明显肿胀）
模型组图1 足爪大体图（模型组足爪可见明显肿胀）
Figure left: Toes swelling value, middle: Spleen/body ratio, right: Thymus/body ratio
Note:* Compare with Control group，*P<0.05
Note:* Compare with Control group，*P<0.05
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