货号: | STP07006 |
数量: | 大量 |
供应商: | SUNBIO |
规格: | 1.0ml |
SunBioTM Trans-EZ 常见细胞系转染试剂说明书 |
Caralog NO.STP07006 产品规格:1 ml/支
试剂保存:4℃保存,请勿冷冻
产品介绍
SunBio Trans-EZ产品适用于绝大多数常见细胞系(株)的基因转染,在最佳实验条件下,转染后细胞的存活率高达90%以上,转染效率高于其他类型的转染试剂。特点:1.转染效率高; 2.细胞毒性低;3.生物稳定性高;4.适用范围广泛;5.不受有无血清及抗生素的影响;6.操作简单,无需更换培养基。
转染概要
1. 细胞状态很大程度上影响了转染效率,推荐使用低代次细胞,并保证细胞状态良好;
2. 为优化转染条件,推荐使用Opti-MEM培养基制备转染试剂和质粒复合物;如果没有准备Opti-MEM培养基则用无血清培养基代替;
3. 为起始优化转染条件,转染细胞时可以分别用1/2、2/2、3/2、4/2、5/2转染试剂(µl)和质粒的比例(µg)分别转染;
4. 为增加实验的准确性和减少检测的误差,建议进行三个平行孔实验;
5.质粒的抽提质量对转染的效果有很大的影响,建议使用高质量无内毒素抽提的超纯质粒,其螺旋质粒含量大于80%,OD260/OD280>1.8。
转染流程
1. 转染前一天,将细胞悬液接种到孔板中,控制细胞转染时的汇合率为70-90%。
2. 制备转染试剂和质粒的复合物:
a.取待转染质粒,用Opti-MEM培养基轻轻混匀;
b.取Trans-EZ转染试剂,用Opti-MEM培养基轻轻混匀;
c.将Trans-EZ稀释液滴加到质粒稀释液中,边加边轻轻混匀,在室温放置20分钟,使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
3. 取出细胞培养板,将步骤2得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到接种好的细胞中,前后轻轻推摇孔板使混合均匀,做好标记,放回培养箱。
4. 转染24-48小时后,观察质粒荧光转染效果,或者检测Luciferase酶活性,或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。
转染系数参考
培养板型号 | 每孔平均底面积 | 铺板细胞悬液体积 | DNA和稀释液总体积 | Trans-EZ和稀释液总体积 |
96-well | 0.3 cm2 | 100 μl | 0.4-0.6μg in 7.5 μl | 0.2-1μl in 7.5 μl |
24-well | 2 cm2 | 500 μl | 0.8-1.2μg in 30 μl | 1-2.5μl in 30 μl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 1.8-2.5μg in 50μl | 2-4μl in 50 μl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 3.5-5 μg in 100 μl | 4-8μl in100μl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 8-10 μg in300 μl | 8-20μl in300 μl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 24-28μg in 800 μl | 20-60μl in800 μl |