血管活性肠肽(VIP)猪Elisa试剂盒使用说明书

供应商：	广锐生物
数量：	1000

血管活性肠肽(VIP)猪Elisa试剂盒使用说明书

96T/48T大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒
CAS:122-97-4,3-苯丙醇/γ-苯丙醇/氢化肉桂醇/γ-羟基丙基苯/3-苯基丙醇/利胆醇/3-苯基-1-丙醇/3-phenylpropanol,BR，99%,100毫升,RT
CAS:11089-65-9,衣霉素/Tunicamycin from Streptomyces lysosuperficus,高纯，98%,5毫克,2～8℃，避光
96T/48T猴子内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒
大鼠elisa试剂盒,大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒,(NF-κB p65)Elisa试剂盒Rat nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA试剂盒
F0324,乳胶手套/Rubber glove,无粉，小号/中号/大号,1000只/盒,RT
F0216,35mm玻底培养皿/Glass Bottom Cell Culture Dish,Φ20mm,10块/包,RT
CAS:16326-32-2,次亚麻酸甲酯/γ-亚麻酸甲酯/次亚麻酸子甲酯/次亚麻子油酸甲酯/(顺,顺,顺)-6,9,12-十八碳三烯酸/γ-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯/γ-Linolenic acid methyl ester,FGC，98.5%,5毫升,避光，-20℃
CAS:9007-73-2,马脾铁蛋白/铁蛋白（马脾）/铁朊/HSF,25毫克,2～8℃
96T/48T人B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒
CAS:299-28-5,葡萄糖酸钙/D-葡萄糖酸钙/葡萄酸钙/Calcium D-gluconate,CP，99%,100克,RT
猪血管活性肠肽(VIP)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中血管活性肠肽(VIP)的含量。
实验原理：
  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪血管活性肠肽(VIP)水平。用纯化的猪血管活性肠肽(VIP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管活性肠肽(VIP)，再与HRP标记的血管活性肠肽(VIP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管活性肠肽(VIP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪血管活性肠肽(VIP)浓度。
试剂盒组成：
 

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
标准品：720ng/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
标准品稀释液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
样品稀释液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

 
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
 

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为480 ng/L，320ng/L ，160ng/L，80 ng/L，40 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项：
 

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，   
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD     
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释      
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标      
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值      
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释      
倍数，即为样品的实际浓度。                  
 
                                             
 
（此图仅供参考）
 
 
 
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
 
检测范围：                                             
18ng/L -600 ng/L                                        
                           
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月