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DTT 二硫苏糖醇
液基细胞保存液（手工耗材）
明胶酶谱法试剂盒，MMP2/9活
通过朝阳分局认证 
FISH（荧光原位杂交）
ZYMO品牌 DNA提取试剂
血液基因组DNA小量提| 货号： | TD325-50 |
| 供应商： | 天漠科技 |
| 英文名： | TIANMO BIOTECH |
| 保质期： | 1年 |
| 保存条件： | 常温 |
| 规格： | 50次 |
|
组织基因组DNA小量提取试剂盒
Catalog No. TD325-50 (50次反应)
TD325-200 (200次反应)
Highlights
- 可从固体组织，血液，细胞，FFPE，头发等来源的样品中提取到高纯度的基因组DNA。
- 结合使用蛋白酶K消化步骤。
- 获得的基因组DNA产量高、纯度好，可以直接用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。
产品组成:
| 试剂盒组成 | 保存 | 50次 | 200次 |
| 蛋白酶K及保存液 | -20℃ | 2x5mg | 2x20mg |
| 2X消化液 | 室温 | 5 ml | 20 ml |
| 基因组DNA裂解液 | 室温 | 50 ml | 2X100 ml |
| 基因组DNA洗涤液1 | 室温 | 15 ml | 50 ml |
| 基因组DNA洗涤液2 | 室温 | 50 ml | 100 ml |
| 基因组DNA洗脱液 2号柱 | 室温 | 10 ml | 20 ml |
| 室温 | 50个 | 200个 | |
| 收集管（2ml） | 室温 | 100个 | 400个 |
Note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
注意事项:
- 环境温度低时基因组2X消化液或者基因组DNA洗涤液1可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
- 蛋白酶K及其保存液可常温运输。使用前需要添加260µl保存液到TD350里的蛋白酶K 里，添加1040µl保存液到TD351里的蛋白酶K 里。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- 推荐：添加β巯基乙醇到基因组DNA裂解液中，终浓度为0.5% 例如，250µl添加到50mlDNA裂解液，500µl添加到100mlDNA裂解液里。
特性:
- 样品种类: 固体组织，全血，细胞，FFPE,毛发等样品。获得的基因组DNA产量高、纯度好， 可以直接用PCR等各种分子生物学实验。
- Abs260/280 ≥ 1.8 。
- 基因组DNA大小: 一般可回收到100bp-40 kb大小左右的基因组DNA。如果样品中存在线粒体DNA，病毒DNA等也会一起提取到。
- DNA 纯度: 获得的基因组DNA产量高、纯度好， 可以直接用PCR等各种分子生物学实验。
- Abs260/280 ≥ 1.8 。
- 基因组DNA回收情况: 50µl 的洗脱液或水可从每mg的心脏，脑组织中提取到1-3µg DNA。每mg的肝，肾，肺组织中提取到3-5 µg DNA。100µl人全血中回收到3µg以上的基因组DNA。
- 需要的仪器设备: 水浴锅或者金属浴（55℃）。微型离心机，涡旋仪。
试剂制备:
1． 使用前需要添加260µl保存液到TD350里的蛋白酶K 里，添加1040µl保存液到TD351里的蛋白酶K 里。蛋白酶K的终浓度约为20mg/ml
2． 添加β巯基乙醇到基因组DNA裂解液中，终浓度为0.5% 例如，250µl添加到50mlDNA裂解液，500µl添加到100mlDNA裂解液里。
操作步骤:
固体组织
以下步骤是针对从25mg新鲜或者冻存的组织中提取到DNA设计的。一般产量是：每毫克的骨骼，心脏和脑组织中可以提取到1-3微克的DNA。每毫克肝，肾，肺等组织可以提取到3-5微克的组织。对于毛发和FFPE样品参照附录的操作步骤
- 对于固体组织（≤25mg）按照以下溶液配比添加到一个离心管中。
2X消化液 95µl
配好的蛋白酶K 10µl
- 混匀并且在55℃孵育1-3个小时。（如果有必要可以进行过夜消化，过夜消化并不会增加产量和影响DNA的完整性）
- 添加700µl基因组DNA裂解液到上述离心管中混匀，并在涡旋仪上振荡，在10,000 x g下离心1分钟分离不溶的沉淀。
- 将上清转移至2号柱中，2号柱套在一个收集管里，在10,000 x g下离心1分钟。
- 将2号柱套在一个新的收集管里。
- 添加200μl的基因组DNA洗涤液1到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
- 添加400μl的基因组DNA洗涤液2到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
- 将2号柱移至干净的1.5ml离心管中直接添加≥ 50μl的基因组DNA洗脱液到柱基质上（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好，如果是25mg的组织可以添加200μl），室温下放置2-5分钟，10,000 x g 离心30秒来洗脱基因组DNA。
全血，生物体液等样品
以下步骤是针对从100µl全血中提取基因组DNA而设计的。血液样品可以是新鲜的或者冻存的，兼容EDTA,柠檬酸，肝素等抗凝剂。也可以提取其他生物体液或小于5x106的细胞悬液。
- 对于100µl全血，如果不足100µl则用水补齐。按照以下溶液配比添加到一个离心管中。
配好的蛋白酶K 5µl
- 混匀并且在55℃孵育20分钟。
- 添加700µl基因组DNA裂解液到上述离心管中混匀，并在涡旋仪上振荡。
- 将上述混合物转移至2号柱中，2号柱套在一个收集管里，在10,000 x g下离心1分钟。
- 将2号柱套在一个新的收集管里。
- 添加200μl的基因组DNA洗涤液1到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
- 添加400μl的基因组DNA洗涤液2到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
- 将2号柱移至干净的1.5ml离心管中直接添加≥ 50μl的基因组DNA洗脱液到柱基质上（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好，一般选择100-200μl），室温下放置2-5分钟，10,000 x g 离心30秒来洗脱基因组DNA。
单细胞层
以下步骤是针对从5x106以内的细胞单层而设计的。虽然细胞类型和培养环境不同，但此操作步骤兼容高密度和低密度的生长细胞。
- 用胰蛋白酶消化或者从培养板等容器中刮下贴壁细胞。在500 x g下离心5分钟细胞悬液，去除上清液，用1ml
H2O 95µl
2X消化液 95µl
配好的蛋白酶K 5µl
- 混匀并且在55℃孵育20分钟。
- 添加700µl基因组DNA裂解液到上述离心管中混匀，并在涡旋仪上振荡。在10,000 x g下离心1分钟分离不溶解的细胞沉淀。
- 将上一步的上清转移至2号柱中，2号柱套在一个收集管里，在10,000 x g下离心1分钟。
- 将2号柱套在一个新的收集管里。
- 添加200μl的基因组DNA洗涤液1到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
- 添加400μl的基因组DNA洗涤液2到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
- 将2号柱移至干净的1.5ml离心管中直接添加≥ 50μl的基因组DNA洗脱液到柱基质上（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好，一般选择200μl如果细胞数达到5x106），室温下放置2-5分钟，10,000 x g 离心30秒来洗脱基因组DNA。
| 培养容器 | 孔或瓶的表面积 | 细胞数 |
| 96孔培养板 | 0.32-0.6 cm2 | 4-5x104 |
| 24孔培养板 | 2 cm2 | 1-3x105 |
| 12孔培养板 | 4 cm2 | 4-5x105 |
| 6孔培养板 | 9.5 cm2 | 0.5-1x106 |
| T25培养瓶 | 25 cm2 | 2-3x106 |
| T75培养瓶 | 75 cm2 | 0.6-1x107 |
| T175培养瓶 | 175 cm2 | 2-3x107 |
参考附录:
头发，毛发等相关样品
需要用到新鲜制备的DTT(未提供)进行溶液的配置，替换针对固体组织操作步骤中的第一步，配置比例如下
H2O 90µl
2X消化液 90µl
DTT(1M) 10µl
配好的蛋白酶K 10µl
之后的操作步骤同固体组织操作。
石蜡包埋组织（FFPE）样品
在采用固体组织操作步骤之前组织首先需要脱蜡。脱蜡步骤如下
1. 尽可能多的去除（切掉）石蜡部分。
2. 将样品移至1.5ml离心管中，添加750µl的二甲苯（未提供）。
3. 短暂涡旋振荡后在室温下放置1小时，期间可使用摇床轻摇。
4. 在10,000 x g下离心1分钟，从样品中去除二甲苯。
重复2-4步
针对步骤5-8，每一步的步骤都是添加洗涤液，短暂涡旋，在摇床上轻摇孵育5分钟，然后在10,000 x g下离心1分钟，去除洗涤液。
5. 用1ml（100%）乙醇洗涤2次 。
6. 用1ml（95%）乙醇洗涤2次 。
7. 用1ml（75%）乙醇洗涤2次 。
8. 用1ml双蒸水洗涤1次 。
9. 从样品中去除尽可能多的双蒸水。
10. 使用样品进行提取或保存在-80℃
温馨提示：不可用于临床治疗。
